目的:本实验体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,并用5-氮胞苷诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,为骨髓间充质干细胞移植治疗心肌纤维化提供良好的种子细胞。方法:（1）通过全骨髓贴壁培养法从wistar大鼠骨髓中分离骨髓间充质干细胞,在37℃5%CO₂培养箱内培养,当贴壁细胞接近大部分融合时反复传代扩增,在倒置显微镜下观察细胞情况,通过MTT法检测第2代骨髓间充质干细胞的吸光度值并绘制生长曲线,同时通过流式细胞仪测定第3代细胞表面CD29和CD45的表达。（2）取生长状态良好的第3代骨髓间充质干细胞使用不同浓度的5-氮胞苷（对照组、5umol/l、10umol/l、15umol/l）诱导24h后换液,在CO₂培养箱内培养,倒置显微镜下观察细胞形态变化,在第28天行免疫细胞化学染色检测肌钙蛋白T（cTnT）、连接蛋白-43（CX-43）、ɑ-平滑肌肌动蛋白（ɑ-SMA）的表达。结果:1.在倒置显微镜下观察原代细胞呈多边形,有集落生长的趋势,约7-10天长满至80%-90%。传代细胞逐代伸展呈长梭形,排列具有方向性,呈漩涡状生长,约4-5天传代一次。2.通过MTT法绘制第2代骨髓间充质干细胞生长曲线发现,细胞在第3-5天增殖速度最快,第6天开始生长趋于平缓甚至有下降趋势,因此最佳传代时间为第4-5天。3.流式细胞仪检测示:第3代骨髓间充质干细胞表面CD29阳性率为99.4%,CD45阳性率为1.4%,表明实验用的第三代骨髓间充质干细胞是纯化的细胞。4.在倒置显微镜及HE染色下观察,对照组细胞形态呈细长梭形,排列具有极性。诱导组在7天开始部分细胞体积变大、形态各异,呈不规则形、三角形、长梭形等,且细胞极性消失,排列不规则;部分细胞伸出粗大突起,彼此融合。5.第28天不同浓度5-氮胞苷诱导后骨髓间充质干细胞通过细胞免疫化学法鉴定胞浆内肌钙蛋白T（cTnT）的阳性表达率分别为13.66±3.21%、44.33±4.04%、32.33±1.15%（P≤0.01）,连接蛋白-43（CX-43）的阳性表达率分别为6.00±2.00%、31.00±4.00%、11.00±1.73%（P≤0.05）,ɑ-平滑肌肌动蛋白（ɑ-SMA）的阳性表达率分别为13.00±4.35%、43.00±4.00%、26.33±1.53%（P≤0.01）,均显著高于对照组。结论:1.全骨髓培养法是一种简单、快速、高效的体外获得纯度较高的骨髓间充质干细胞培养方法。2.10umol/l的5-氮胞苷可以在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化,诱导后阳性表达率最高。