1.生防细菌的分离筛选 从所采集土样中分离纯化出的501株细菌中,筛选出对16株病原真菌抑制力均最强的I7、M22BH3作为目标生防菌。I7分离自甘肃省兰州市安宁区茄子地的土壤中,M22BH3分离自甘肃省兰州市范家坪百合地的土壤中。生防菌I7、M22BH3对16株病原真菌均表现出显著的抑制作用,拮抗带直径最高分别达37.2mm和36.9mm。它们的无细胞培养液对16株病原真菌也均具有明显的抑制作用,其原液对病原真菌的抑制率分别高达82.6%和83.3%。 2.生防细菌I7、M22H3的系统发育分析 通过形态观察、环境因素影响的测定、生长特征、生理生化指标测定、16S rRNA寡核苷酸序列分析以及DNA的（G+C）mol%值测定,确定生防菌I7是一株新的解淀粉芽孢杆菌,保藏于CCTCC,保藏名Bacillus amyloliquefaciens I7,保藏号M206027;生防菌M22BH3是一株新的枯草芽孢杆菌,保藏于CCTCC,保藏名Bacillus subtilis M22BH3,保藏号M206028。现已对这两株生防菌向国家知识产权局申请了专利,专利申请号分别为200610200364X和2006102003654。 3.抗菌物质的分离与性质研究 研究发现,生防菌I7、M22BH3的无细胞培养液具有较好的热稳定性:121℃处理20min后,I7的无细胞培养液仍可保持75%的抑菌活性;M22BH3的无细胞培养液仍可保持71.4%的抑菌活性,且对蛋白酶K和胰蛋白酶都不敏感。通过（NH₄）₂SO₄分级盐析、SephadexG-50分子筛层析、DEAE-sephadex A-25阴离子交换层析,从它们的无细胞培养液中对抗菌物质进行了初步的提取纯化。得到的抗菌物质经质谱检测,结果表明其都为多肽和小分子量蛋白质的混合物。