沙枣果黄酮提取及生物活性研究

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沙枣属于胡颓子属落叶乔木或小乔木,沙枣作为维吾尔药(称“吉嘎旦”)长期在民间应用,用于治疗脾胃虚弱、消化不良、肠炎腹泻、肺热咳嗽等疾病[1]。沙枣果黄酮类化合物是从沙枣果中提取的,两个具有酚羟基的苯环通过中央三碳原子相互连接的化合物[2]。尽管黄酮不被认为是维生素,但是在生物体内的反应里,却被认为具备营养功能,被称为“维生素P”[3]。具有抗菌,抗氧化,抗病毒,抗肿瘤,抗炎,镇痛,抗心律失常作用和保肝等活性[4],目前对沙枣果黄酮提取及抗氧化和抗菌机制方面的研究报道还很少,为更好的开发利用沙枣植物资源,本研究围绕沙枣果黄酮的提取及抗氧化和抑菌效果进行研究。首先,采用水浴和匀浆两种方法来提取沙枣果黄酮类化合物,通过优化比较后,选取最优方法用于沙枣果黄酮类化合物的提取,正交优化结果表明:水浴法提取沙枣果黄酮类化合物的最佳工艺条件为:乙醇浓度70%、水浴温度85℃℃、料液比1:30 g.mL-1、水浴时间30 min、水浴提取次数2次;匀浆法提取沙枣果黄酮类化合物的最优工艺条件为:室温、乙醇浓度55%、料液比1:30 g.mL-1、匀浆时间5 min、匀浆提取次数2次。水浴提取沙枣果黄酮类化合物的最高得率为4.50%,匀浆提取沙枣果黄酮类化合物的最高得率为6.57%,通过实验结果比较得知匀浆法更适合沙枣果黄酮类化合物的提取。其次,选用大孔吸附树脂对提取后的沙枣果黄酮类化合物进行进一步富集处理。通过对极性、平均孔径、比表面积不同的9种大孔吸附树脂进行筛选,选出3种大孔吸附树脂进一步进行静态动力学分析,最终选定AB-8型大孔吸附树脂进行动态实验,实验结果表明:沙枣果黄酮类化合物的富集最优单因素为:上样流速2 BV·h-1、上样浓度2.43 mg.mL-1、乙醇浓度70%、洗脱速率2 BV·h-1。按照以上最优富集条件,所得出沙枣果总黄酮纯度由富集前的9.73%增加到富集后的49.52%,纯度提高5.09倍,回收率是72%:其中,金丝桃苷含量由富集前的0.53%增加到富集后的3.07%,纯度提高了5.79倍。实验结果表明,AB-8型大孔吸附树脂可以用于沙枣果黄酮化合物的富集。最后,对富集前后的沙枣果黄酮类化合物进行体外抗氧化和抑菌实验。由体外抗氧化实验结果可知,在DPPH、抗羟基自由基、抗超氧阴离子自由基和还原力这几方面,抗氧化顺序均为,Vc>富集后沙枣果样品>富集前沙枣果样品。在对DPPH自由基的清除能力和抗羟基自由基能力方面,富集后沙枣果样品的抗氧化能力是富集前的两倍左右;而在抗超氧阴离子自由基能力和还原能力发面,富集后的沙枣果样品的抗氧化能力远高于富集前的沙枣果样品。由此可知,富集后的沙枣果样品的抗氧化能力更强。此外,通过抑菌实验,可以得出以下几点结论,第一,沙枣果富集后的样品的抑菌效果要优于沙枣果富集前的样品;第二,在抑菌效果中,沙枣果富集前后样品对3种细菌的抑菌效果均优于3种真菌;第三,在3种细菌中,沙枣果富集前后样品对革兰氏阳性菌的抑菌效果均优于革兰氏阴性菌,并且在革兰氏阳性菌中,对无芽孢菌种(金黄色葡萄球菌)的抑菌效果要优于有芽孢的菌种(枯草芽孢杆菌)。本文选用匀浆法提取沙枣果黄酮类化合物,提取方便,得率高,无任何污染。选用AB-8型大孔吸附树脂对沙枣果黄酮类化合物进行富集,效果显著,这两种方法的结合为沙枣黄酮提取的工业生产奠定了理论基础和参照。沙枣果黄酮提取物富集后样品的抗氧化能力比富集前明显提高,富集后的样品对于金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌和大肠杆菌均具有一定的抑菌作用。因而,沙枣果提取的黄酮类化合物进一步研究可用于天然抑菌剂、天然化妆品等领域,为沙枣的进一步深加工提供了理论证据。
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