LncRNA XIST在原发性胆汁性胆管炎免疫细胞中的作用研究

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目的:原发性胆汁性胆管炎(Primary biliary cholangitis,PBC)是一种以抗线粒体抗体(Anti-mitochondrial antibodies,AMAs)阳性、肝功损害为主要特征的自身性免疫性疾病,显著的男女发病差异使LncRNA XIST成为探究PBC发病机制的重要切入点。本研究探究了LncRNA XIST在PBC患者和健康对照组免疫细胞中的差异,以及LncRNA XIST对PBC患者Na?ve CD4~+T淋巴细胞增殖、分型以及相关细胞因子的影响。方法:本研究收集于2018年6月至2019年6月在青岛大学附属医院风湿免疫科就诊的20例PBC患者和20例同期体检的健康者的外周静脉血标本。采用磁珠分选的方法分选出外周静脉血中的免疫细胞,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和荧光原位杂交技术(FISH)定量和定位分析PBC患者和健康对照组NK细胞、B细胞、CD4~+T淋巴细胞、CD8~+T淋巴细胞中LncRNA XIST表达水平的异同。然后,根据siRNA筛选出的XIST基因干扰序列制备慢病毒,稳定干扰PBC患者Na?ve CD4~+T细胞中LncRNA XIST的表达,根据有无慢病毒的干扰分为处理组和未处理组;利用CCK8法检测PBC患者两组Na?ve CD4~+T细胞增殖能力的变化。最后分别将PBC患者和健康对照组的Na?ve CD4~+T细胞与胆管上皮细胞进行共培养,再利用qRT-PCR、酶联免疫吸附测定法(ELISA)和流式细胞术(FACS)检测LncRNA XIST对Na?ve CD4~+T淋巴细胞分型以及相关细胞因子的影响。结果:通过qRT-PCR检测PBC患者组和健康对照组外周静脉血中各类免疫细胞的LncRNA XIST表达量发现,PBC患者NK和CD4~+T淋巴细胞中的LncRNA XIST表达量明显高于健康对照组(1.19±?1.23 vs 0.34±?0.31,p<0.01;1.26±?0.09 vs 0.48±?0.19,p<0.05),并且可以清晰的定位在细胞核上。通过慢病毒干扰PBC患者Na?ve CD4~+T细胞中LncRNA XIST的表达发现,LncRNA XIST可以促进Na?ve CD4~+T细胞的增殖。通过Na?ve CD4~+T细胞与胆管上皮细胞共培养发现,干扰LncRNA XIST的表达可以减少Na?ve CD4~+T细胞IFN-γ,IL-17,T-bet和RORγt的分泌,从而降低Th1和Th17的细胞比例(5.88±1.18 vs 2.64±0.79,p<0.01;4.91?±?1.51 vs 2.3?±?0.76,p<0.05)。结论:LncRNA XIST与PBC患者淋巴细胞的异常具有相关性。LncRNA XIST在PBC患者Na?ve CD4~+T细胞中的高表达会刺激Na?ve CD4~+T细胞增殖,以及刺激炎性细胞因子分泌,导致Th1和Th17比例升高,可能促使了PBC的发生。因此,本研究为日后进一步探究PBC发病机制和寻求临床药物治疗新靶点提供了方向。
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