裙带菜孢子叶多糖的提取分离及生理活性研究

来源 :大连工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pengweimin
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裙带菜(Undariapinnatifida)又名海荠菜,是我国一种大型经济海藻。褐藻多糖是裙带菜主要的活性物质,其中的褐藻糖胶(FSP)具有调节免疫、抗氧化、抗肿瘤等功效,因此研究褐藻多糖的活性及其结构具有重要意义。本文以大连裙带菜为研究对象,采用纤维素酶辅助提取,结合乙醇醇沉的方法从裙带菜孢子叶中分离褐藻多糖。结果显示,纤维素酶提取的最佳工艺条件为:加酶量1.2%;时间3h;pH4.8;液料比60:1;温度50℃,此时多糖提取率为7.13%。并利用响应面中的Box-Behnken设计优化了纤维素酶提取的工艺条件,最终确定纤维素酶辅助提取的工艺条件并修订为:时间3.2h;液料比58:1;加酶量1.3%。在此条件下,多糖的提取率为 7.25%。以褐藻多糖为研究对象考察小鼠体内的抗氧化活性和免疫活性。研究发现,褐藻多糖对氧化损伤小鼠有显著的保护作用,极显著地降低小鼠体内组织中丙二醛(MDA)水平(p<0.01),有效提高超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力(p<0.01),因此,褐藻多糖能够提高氧化损伤小鼠机体的抗氧化能力。同时,褐藻多糖还可以显著增强正常小鼠的脾脏、胸腺指数,淋巴细胞增殖能力,自然杀伤细胞杀伤活性,提高小鼠体液免疫能力。本文对FSP的分离纯化工艺及其理化性质、体外生物活性也进行了分析研究。实验结果表明,经过提取、分离和初步纯化后,FSP粗品得率为6.43%。FSP粗品经过Cellulose-DEAE 52层析柱分级纯化后得到四个组分:FSPⅠ、FSPⅡ、FSPⅢ、FSPⅣ。苯酚-硫酸法测定组分Ⅰ~Ⅳ中糖含量分别为21.89%、24.14%、32.32%、31.92%;福林-酚法测定组分Ⅰ~Ⅳ中蛋白含量分别为20.40%、14.36%、15.08%、11.56%;比浊法测定组分Ⅰ~Ⅳ中硫酸根含量分别为16.40%、33.33%、36.53%、30.33%;间羟联苯法测定组分Ⅰ~Ⅳ中糖醛酸含量分别为5.00%、4.34%、3.10%、2.87%。另外,采用气相色谱法测定四个组分的单糖组成:FSP Ⅰ中葡萄糖:鼠李糖:甘露糖:半乳糖:岩藻糖=1.0:1.2:2.1:5.8:26.6;FSP Ⅱ 中甘露糖:半乳糖:岩藻糖=1.0:1.7:22.6;FSPⅢ 中甘露糖:半乳糖:岩藻糖=1.0:5.9:18.6;FSPⅣ中甘露糖:半乳糖:岩藻糖=1.0:19.3:21.8,并含有痕量的葡萄糖。褐藻糖胶组分的体外生物活性研究表明,在高浓度情况下,FSP Ⅰ和FSPⅡ无细胞毒作用,其中FSP Ⅳ对细菌脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞NO释放有明显的抑制作用;FSP Ⅳ具有较强的抵御tBOOH致细胞氧化损伤的作用;褐藻糖胶的四个组分均能极显著地促进淋巴细胞的增殖。
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