【摘 要】
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为研究内源性肺腺瘤病毒基因序列(enJSRV)在蒙古羊基因组中的分布,参照内蒙古农业大学在GenBank中发表的DQ838493基因组全序列、肺表面活性蛋白(SP-A)基因、enJSRV6和enJSRV1
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为研究内源性肺腺瘤病毒基因序列(enJSRV)在蒙古羊基因组中的分布,参照内蒙古农业大学在GenBank中发表的DQ838493基因组全序列、肺表面活性蛋白(SP-A)基因、enJSRV6和enJSRV10的长末端重复序列(LTR),设计合成5对引物,从经临床病理学检查健康无病绵羊采静脉血提取总DNA,利用PCR技术,以提取的总DNA为模板对SP-A蛋白基因、enJSRV6、enJSRV10的5’和3’端的长末端重复序列(LTR)基因进行PCR扩增,产物分别为5个(SP-A、enJSRV6-5’、enJSRV6-3’、enJSRV10-5’和enJSRV10-3’)特异性基因片段,将其分别克隆入pMD19-T载体中进行双向测序并用DNAstar软件进行序列拼接和分析。结果表明,能被exJSRV插入的SP-A蛋白基因没有相应的enJSRV基因,而内源性病毒基因(enJSRV6、enJSRV10)在蒙古羊基因组中有相应的插入位点和分布,并通过对内源性病毒(enJSRV6、enJSRV10)基因的两端LTR的分析,显示蒙古羊的内源性肺腺瘤病毒基因具有典型的长末端重复(LTR)结构,两端的“U3(R)U5”结构在每个内源性病毒基因是相对稳定的,并且只有在U3区是可变区,R和U5区是非常保守的。为了进一步研究内源性肺腺瘤反转录病毒(enJSRV)基因在蒙古羊基因组中的分布,利用荧光原位杂交(FISH)技术,参照enJSRV(DQ838493)基因组中的gag基因,设计合成一对引物并进行PCR扩增,以克隆纯化的PCR产物为模板合成探针,用绵羊外周血淋巴细胞制备的中期染色体作杂交标本,通过核型分析(计算相对长度,确定信号所在的染色体)并与绵羊标准化G-带模式图比较,对gag基因进行物理定位,初步确定了该基因在蒙古羊1q45、1p23、2q41、3q23、6q13、9q22和14q25等6条染色体上均有分布。
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