【摘 要】
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该文以阿维菌素产生菌Streptomyces avermitilis为研究对象,利用基因工程方法,将出发菌株Streptomyces avermitilisS-2基因组DNA上的阿维菌素生物合成基因簇进行了基因改造.
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该文以阿维菌素产生菌Streptomyces avermitilis为研究对象,利用基因工程方法,将出发菌株Streptomyces avermitilisS-2基因组DNA上的阿维菌素生物合成基因簇进行了基因改造.将该基因簇中的aveD基因通过插入外源的安普霉素抗性基因片段使其失活,导致发酵产物中4个A组分（不需要的组分）的消失;将基因簇中的aveC基因通过同样手段,使其失活,导致发酵产物中4个“1”组分的消失,而主要积累“2”组分（进一步改造可成为伊维菌素的前体B<,2>组分）.为了得到aveD基因片段,首先根据已知的阿维菌素生物合成基因簇的核苷酸序列,设计并合成了由18和20个核苷酸组成的5′端和3′端引物;以Streptomyces avermitilis S-2基因组DNA片段.将1.5kb的安普霉素抗性基因片段插入到aveD基因中的NruI酶切位点,再将此灭活的aveD基因片段插入到具有接合转移功能（含有oriT基因）的链霉菌-大肠杆菌穿梭质粒pHJL401的多克隆位点区,由此得到重组质粒pC05.对菌株AveC9发酵产物的HPLC分析表明,菌株AveC9正如预粒的一样不能生物合成四种“1”组分,而只能合成四种“2”组分.
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