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现如今,四倍体广泛的应用在动物繁殖技术领域中,特别是在干细胞中利用四倍体和二倍体制备嵌合体来研究动物胚外组织缺陷。通过不同的技术有多种四倍体囊胚的制作方法,但是不同制备方法都存在不同程度的优缺点,需要不断开发新的四倍体制备方法。因此,本研究使用一种新型细胞周期性依赖激酶(cyclin-dependent kinase, CDK)抑制剂SU9516体外高效诱导猪孤雌激活(parthenogenetic activation, PA)四倍体囊胚。SU9516可以通过抑制猪PA胚胎第二极体的排出以及抑制中心体复制两方面来体外制备猪PA四倍体囊胚。同时,SU9516可以通过抑制CDKI活性间接降低MPF活性来提高猪PA胚胎体外发育能力。本研究主要包括以下几个实验：一、SU9516体外制备猪PA四倍体囊胚。试验1：电激活猪胚胎之后,在猪PA胚胎体外培养液中添加不同浓度SU9516促进猪其体外发育能力。结果表明：添加10 μMSU9516与其他浓度(1 μM,5 μM,100μM)及素对照组5 μg/ml细胞松弛(cytochalasin B, CB)相比可以显著地提高猪PA胚胎体外发育能力(47.5% vs.26.2%,28.9%,40.6%, and 25.8%, P< 0.05)。用最佳浓度(10μM)SU9516处理不同的时间后观察胚胎体外发育能力,结果表明：SU9516处理4h猪PA胚胎具有最好的体外发育能力(47.5%vs.39.0%,33.7%, and 39.1%).试验2：电激活猪PA胚胎之后,分别利用添加10 μM SU9516或5μg/ml CB的体外培养液中处理2h后观察猪PA胚胎第二极体的排出情况。结果表明：10μMSU9516组,5 μg/ml CB组与未处理组相比显著地降低了第二极体的排出率(14.0%,13.8% vs.78.8% P< 0.05).为了确定囊胚的染色体组数,对SU9516组合、CB组处理后获得的猪PA囊胚进行核型分析。结果显示：SU9516处理组的囊胚中四倍体率显著地高于CB处理组(55.8%vs.14.0 P<0.05)试验3：为了进一步确认不同处理组中猪PA囊胚的染色体组数。利用Hoechest33342染色不同处理组中的细胞数目。结果表明：SU9516处理组中囊胚细胞数显著地低于CB组以及6-DMAP组(34.4±17.5bvs.46.4±10.5a,45.1±10.6a)。二、SU9516抑制MPF活性提高猪PA胚胎体外发育能力。实验1：分别检测10μM SU9516和5μg/ml CB处理猪PA胚胎4 h后MPF表达活性。结果显示：SU9516处理下的猪PA胚胎MPF活性水平显著地低于CB组(103.2pg/ml vs.131 pg/ml)。总结：1、1)SU9516处理提高猪PA胚胎体外发育能力最佳条件为10μM,4 h。2)SU9516可以抑制猪PA胚胎第二极体排出和诱导猪PA四倍体囊胚。3)SU9516处理可以显著地降低猪PA囊胚细胞数。2、SU9516通过对MPF活性的改变来提高猪PA胚胎体外发育能力。