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目的:检测PCSK6在胃癌组织与细胞株中的表达水平,分析PCSK6表达与胃癌患者临床病理参数之间的关系。探讨PCSK6基因沉默与过表达对胃癌细胞增殖、侵袭转移中的作用及分子机制。方法:应用实时定量PCR,免疫组织化学及western blot检测103例胃癌样本组织与配对癌旁组织及胃癌细胞株中PCSK6蛋白表达水平并分析PCSK6表达与临床病理参数之间的关系。CCK8、集落生成实验、细胞划痕实验与trans-well实验检测各组胃癌细胞增殖、迁移侵袭能力;应用裸鼠皮下种植瘤模型与肺转移模型进一步验证PCSK6在体内影响成瘤及转移方面的作用。免疫组化方法检测胃癌组织样本中TGF-β1与E-cadherin的表达水平,分析PCSK6,TGF-β1,E-cadherin三者的相关性。ELISA检测各组胃癌细胞上清中TGF-β1蛋白表达差异。western blot检测处理组与对照组细胞株中增殖相关通路分子表达差异,同时检测EMT相关指标及其他侵袭转移相关分子在各组细胞中的表达差异。结果:1、PCSK6在胃癌组织中表达高于相应的癌旁组织,PCSK6的表达与肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移相关。PCSK6在胃癌细胞株中普遍高表达。2、CCK8、集落生成实验、细胞划痕实验以及trans-well实验显示,PCSK6可显著增强胃癌细胞增殖、克隆形成以及迁移侵袭能力。3、裸鼠皮下种植瘤模型显示,PCSK6可显著提高胃癌细胞的致瘤性并促进移植瘤增殖。肺转移模型结果显示,PCSK6可显著提高胃癌细胞肺转移内转移灶数目。观察裸鼠生存情况,绘制K-M曲线,应用Log Rank统计P值,成瘤裸鼠过表达组中位生存时间更短。5、免疫组化检测结果显示,TGF-β 1阳性表达较高,与PCSK6表达水平呈正相关(r=0.217,P<0.05),E-cadherin 阳性表达较弱,与PCSK6表达水平呈负相关(r=-0.307,P<0.05),而 TGF-β 1 与 E-cadherin 表达亦呈负相关(r=-0.324,P<0.01)。6、ELISA结果显示,TGF-β 1在胃癌细胞上清中表达处理组与对照组有显著差异,与western blot检测各组细胞内TGF-β 1表达水平趋势基本一致。Western blot显示,过表达细胞株中PI3K/AKT与TGF-β信号通路激活,p-AKT上调,P21下调,EMT相关指标E-cadherin下调,N-cadherin上调,Vimentin上调,细胞外基质降解相关蛋白MMP2及MMP9上调,干扰后则出现相反的结果。结论:1、PCSK6在胃癌组织及细胞株中呈高表达,且与肿瘤大小、TNM分期及淋巴结转移侵袭转移相关。2、PCSK6在体内体外可促进胃癌细胞的增殖、侵袭转移能力。PCSK6可通过PI3K/AKT/P21信号通路介导胃癌细胞的增殖。PCSK6可通过调控TGF-β信号通路诱导EMT及MMP2、MMP9的表达从而促进胃癌的侵袭转移。