第一部分龙血素A/B抗血小板功能研究目的：传统中药血竭具有活血化瘀、消肿定痛的作用。现代研究发现其有活血与止血作用、镇痛抗炎和抗血小板聚集作用。血竭中抗血栓成分主要为黄酮类化合物，龙血素A和龙血素B即是其中两种重要的成分，上海大学生命科学院研究显示300μg/ml（约1mM）的龙血素A和龙血素B能80%以上的抑制ADP诱导的人血小板聚集作用，但对其他激动剂如胶原、CRP（collagenrelated peptide，胶原相关肽）、凝血酶和ADP(adenosine diphosphate，二磷酸腺苷)诱导的血小板聚集和其他的血小板功能以及抗血小板机制尚不清楚。本实验主要探讨血竭黄酮类化合物龙血素A和龙血素B抗血小板作用及其机制。方法：采用血小板聚集检测仪、流式细胞仪和荧光显微镜观察不同浓度的龙血素A和龙血素B对血小板聚集、释放、扩展等功能的影响。结果：龙血素A和龙血素B均能显著性的抑制胶原、CRP、ADP和凝血酶诱导的小鼠血小板聚集，两者均呈剂量依赖性。龙血素A对胶原刺激的血小板聚集抑制作用较强，100μM抑制血小板聚集达84.8%，对CRP、ADP和凝血酶刺激的血小板聚集抑制作用依次减弱；龙血素B对胶原和CRP刺激的血小板抑制作用类似于龙血素A对胶原刺激的血小板抑制作用，同样地，对ADP和凝血酶诱导的血小板聚集抑制作用较弱。龙血素A和龙血素B同时能显著的抑制凝血酶刺激的血小板P-selectin表达，但仅龙血素A能显著的抑制CRP刺激的血小板P-selectin表达，龙血素B则对其表达几乎没有影响。另外，龙血素A能显著的抑制小鼠血小板ATP的释放和人血小板在固化纤维蛋白原上的扩展。结论：龙血素A和龙血素B能剂量依赖性的的抑制胶原、CRP、ADP和凝血酶诱导的血小板聚集，龙血素A和龙血素B还能显著的抑制凝血酶刺激的血小板P-selectin表达，龙血素A能显著的抑制小鼠血小板ATP的释放和人血小板在固化纤维蛋白原上的扩展。第二部分龙血素A/B抗血小板作用机制研究目的：探讨龙血素A和龙血素B发挥抗血小板活化的作用机制方法：洗涤血小板孵育龙血素A和龙血素B后，给予胶原刺激血小板活化，裂解细胞，采用Western Blot技术检测Ak（tSer473/474）、Sr（cTyr416）和JNK（Thr183/Tyr185）的磷酸化表达，并检测给予龙血素A后不同时间点以及协同给予血小板PI3K抑制剂后血小板Akt磷酸化表达的变化。结果：龙血素A和龙血素B能明显的抑制胶原刺激的Akt（Ser473/474）磷酸化，对Src（Tyr416）的磷酸化影响较弱，对JNK（Thr183/Tyr185）的磷酸化几乎没有影响，龙血素A和龙血素B两者的作用类似。Akt的磷酸化表达呈时间依赖性，但给予龙血素A后，其表达一直处于很低的水平。PI3K抑制剂LY294002能增强龙血素A对Akt磷酸化的抑制作用。结论：龙血素A和龙血素B可能通过抑制血小板PI3K/Akt信号通路发挥抗血小板作用。