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研究背景:酮病是围产期奶牛常见的一种营养代谢性疾病,其主要病理学特征为高酮血症、高非酯化脂肪酸(NEFAs)血症和低血糖症。过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)是由PPARα,PPARβ/δ和PPARγ组成的核受体家族,主要负责调节机体细胞分化和脂代谢等,与体内多种生物学功能的调控有关。研究目的:本试验通过向体外培养的牛子宫内膜细胞培养液中添加外源性β-羟丁酸(BHBA)和NEFAs,检测BHBA和NEFAs对细胞过氧化物酶体增殖物激活受体PPARα,PPARβ和PPARγ基因表达水平的影响,为进一步深入研究酮病对奶牛物质代谢的影响及其与围产期其他常见病之间的联系提供理论依据。研究方法:本试验采取体外培养牛子宫内膜细胞(BEND),并向其中添加浓度为0、0.6、1.2、2.4 mmol/L BHBA和0、0.3、0.6、1.2 mmol/L NEFAs,分别提取细胞总RNA和总蛋白,进而通过实时荧光定量PCR、免疫蛋白印迹法等方法检测BEND细胞中PPARα、PPARβ和PPARγ的mRNA和蛋白表达水平,研究不同浓度BHBA和NEFAs对PPARs表达的影响。结果:与对照组相比,外源性BHBA在BHBA浓度为0.6、1.2 mmol/L时可抑制PPARα、PPARβmRNA的表达,在0.6 mmol/L浓度时进可抑制PPARγmRNA的表达,在BHBA浓度为2.4 mmol/L时可促进PPARα、PPARγmRNA的表达。随着BHBA浓度增加时,PPARα、PPARβ、PPARγ的蛋白表达量也显著增加。与对照组相比,外源性NEFAs可显著促进BEND细胞中PPARβmRNA表达,呈剂量依赖性;显著抑制PPARγmRNA表达,但无剂量依赖性;而不同浓度NEFAs对BEND细胞中PPARαmRNA表达无显著影响。随着NEFAs浓度增加时,PPARβ的蛋白表达量也显著增加;外源性NEFAs可在浓度为0.3、1.2 mmol/L时,显著增加PPARα的蛋白表达;在浓度为0.6mmol/L浓度时降低PPARγ的蛋白表达。结论:高浓度的BHBA和NEFAs可改变牛子宫内膜细胞PPARα、PPARβ、PPARγ等基因表达水平,可能通过过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARs)途径进一步影响体内多种代谢过程。