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目的:通过研究不同时程电针心肌缺血（Myocardial ischemia,MI）大鼠“神门”穴后血清（简称电针血清）对H9C2细胞超极化激活的环核苷酸2（Hyperpolarizationactivated cyclicnucleotide,HCN2）蛋白和m RNA表达的影响,探讨电针神门不同时程对心肌缺血模型大鼠的保护作用及电针血清对H9C2细胞的效应,为进一步研究电针血清的效应物质提供实验支持。方法:将90只健康雄性SD大鼠同等条下饲养,用Powerlab 8导生理记录系统记录分析大鼠心电图,行冠状动脉左前降支结扎法复制大鼠心肌缺血模型,心电图异常和模型复制失败者剔除,将模型复制成功的大鼠随机分为正常组、模型组、电针1d组、电针3d组、电针5d组和电针7d组,每组最终纳入6只,各电针组大鼠在模型复制后第2天予以电针双侧“神门”穴治疗,频率2HZ,电流强度为12m A,以大鼠爪部轻微抖动为度,电针15min/次,1次/d,根据不同电针治疗组设置连续电针天数,末次电针治疗后采集大鼠心肌组织以及腹主动脉血,4℃、3500rpm离心20min,取上清100μl分装,其余血清于56℃水浴锅中灭活30min,在超净工作台用0.22（?）m微孔滤膜过滤除菌备用,采用酶联免疫吸附法（Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA）检测各组大鼠血清中肌钙蛋白I（troponin I,cTn-I）、肌钙蛋白T（troponin T,cTn-T）的含量以及血清和心肌组织中cAMP与cGMP的含量;大鼠心肌细胞株H9C2（2-1）细胞在含10%胎牛血清（Fetal Bovine Serum,FBS）,100U/ml青霉素和100ug/ml链霉素的Medium 199/EBSS培养基中,置饱和湿度下、5%CO2、37℃微生物培养箱中培养,将按一定密度接种生长的H9C2细胞,弃原生长培养基,以含各组10%电针血清的培养基继续培养24h,收集总蛋白和总RNA,采用蛋白免疫印迹法（Western-blot,WB）检测H9C2细胞HCN2蛋白的表达量,逆转录聚合酶链反应（Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）法检测H9C2细胞HCN2 m RNA的表达量。结果:1电针不同时程的效应:1.1 ECG结果显示1)各不同时长电针大鼠在MI模型复制前后以及电针治疗后的HR呈现不同趋向的变化,与模型复制前相比,各组大鼠HR在模型复制后总体呈减慢状态,但差异无统计意义（p>0.05）,电针治疗后呈增快状态,差异无统计意义（p>0.05）。2)与模型复制前相比,各不同时程电针组大鼠在模型复制后ST Height的高度明显上升,差异有统计学意义（p<0.01）;与模型复制后相比,不同时程电针治疗后ST Height的高度明显下降,差异有统计学意义（p<0.01）。3)各不同时程电针大鼠在MI模型复制前后以及电针治疗后的T波波幅呈现不同变化,模型复制后大鼠T波有抬高或倒置两种情况的存在,提示模型复制成功;不同时程电针治疗后,抬高或倒置的T波表现为趋于正常状态,表明不同时程电针治疗均有不同程度的治疗作用。1.2 ELISA检测结果显示1)与正常组相比,模型组大鼠血清中cTn-I和cTn-T的含量均显著升高,差异具有统计学意义（p<0.01）;与模型组相比,不同时程电针组血清cTn-T的含量均明显降低,差异有统计学意义（p<0.01或p<0.05）,电针1d组cTn-I含量明显降低,差异有统计学意义（p<0.05）;与电针1d组相比,电针5d组cTn-T含量、电针3d组cTn-I含量较高,差异有统计学意义（p<0.01或p<0.05）;与电针3d组相比,电针5d和7d组cTn-T含量较高,电针7d组cTn-I含量较低,差异有统计学意义（p<0.01或p<0.05）。2)与正常组比较,模型组大鼠血清中cAMP的含量明显降低,心肌组织中cAMP含量明显升高,差异有统计学意义（p<0.01）;与模型组比较,电针1d组大鼠血清和心肌组织中cAMP含量降低,但差异均无统计学意义（p>0.05）,电针3d组血清cAMP含量升高、心肌组织中cAMP含量降低,差异有统计学意义（p<0.01）,电针5d组血清和心肌组织中cAMP含量的变化无统计学意义（p>0.05）,电针7d组血清中cAMP含量升高,差异有统计学意义（p<0.01）,但心肌组织中cAMP含量的变化无统计学意义（p>0.05）;与电针1d组比较,电针3d和7d组血清中cAMP含量较高,差异有统计学意义（p<0.01）;与电针3d组比较,电针5d组血清cAMP含量较低,差异有统计学意义（p<0.01）;与电针5d组比较,电针7d组血清cAMP含量较高,差异有统计学意义（p<0.01）;不同时程电针组之间心肌组织中cAMP含量的变化差异无统计学意义（p>0.05）。3)与正常组比较,模型组大鼠血清和心肌组织中cGMP的含量升高,差异具有统计学意义（p<0.05）;与模型组比较,电针1d和5d组血清中cGMP含量降低、电针3d组含量升高,差异有统计学意义（p<0.05）,电针7d组大鼠血清中cGMP含量降低,但差异无统计学意义（p>0.05）,电针1d组大鼠心肌组织中cGMP的含量降低,但差异无统计学意义（p>0.05）,电针3d组心肌组织中cGMP含量降低,差异有统计学意义（p<0.05）,电针5d和7d组心肌组织中cGMP的含量变化无统计学意义（p>0.05）;与电针1d组比较,电针3d组血清中cGMP含量明显上升,差异有统计学意义（p<0.01）,电针5d和7d组的变化无统计学意义（p>0.05）;与电针3d组比较,电针5d和7d组血清cGMP含量下降、心肌组织中含量上升,差异有统计学意义（p<0.01或p<0.05）。2电针血清对H9C2细胞HCN2表达的影响2.1 Western-blot检测结果显示:与正常血清组干预后HCN2蛋白表达量相比,模型血清组干预后HCN2蛋白表达量明显升高,差异有统计学意义（p<0.01）;与模型血清组干预后相比,电针血清组干预后HCN2蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义（p<0.01）,电针1d、3d和5d血清组蛋白表达量相对较低,电针7d血清组蛋白表达量又有所升高,差异无统计学意义（p>0.05）。2.2 RT-PCR检测结果显示:与正常血清组干预后相比,模型血清组干预后H9C2细胞HCN2 m RNA表达量降低,差异有统计学意义（p<0.01）;与模型血清组干预后相比,电针1d、3d和5d血清组干预后的差异无统计学意义（p>0.05）,电针7d血清组干预后,HCN2m RNA表达量升高,差异有统计学意义（p<0.01）。结论:不同时程电针血清明显调控H9C2细胞HCN2蛋白和m RNA的表达。