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目的：观察蝎毒多肽提取物(PESV)对小鼠H22肝癌移植瘤肿瘤组织中PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A的表达及肿瘤新生微血管密度(MVD)的影响，并进一步揭示PESV抗肿瘤血管生成的可能机制，为临床肝癌的治疗提供实验依据。方法：1．建立H22肝癌皮下荷瘤模型，随机分为荷瘤对照组（对照组），PESV高(40mg/kg)、低(10mg/kg)剂量组，5-FU(20mg/kg)组，每组10只。连续干预14天。绘制肿瘤体积生长曲线并计算抑瘤率，观察PESV对肿瘤生长的抑制作用。2．常规HE染色，观察各组肿瘤组织病理变化。3．采用免疫组织化学法检测各组肿瘤组织MVD、PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A蛋白水平表达。4．Western blot检测各组肿瘤组织PTEN、PI3K、P-Akt、Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A蛋白水平表达。5．ELISA法检测H22肝癌小鼠血清中PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A的水平。结果：1．PESV对H22肝癌生长的影响随着干预时间的增长，各组小鼠移植瘤的体积逐渐增加，5-FU组，PESV高、低剂量组分别从第15、17、19天起与对照组肿瘤体积比较差异有统计学意义（P<0.05）。与对照组比较，5-FU组和PESV高、低剂量组肿瘤质量降低，肿瘤体积缩小（P<0.05，P<0.01），IR分别为64.8%、43.7%和32.4%。PESV高、低剂量组间瘤重及肿瘤体积均有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。2．PESV处理后H22肝癌肿瘤组织病理学变化经H＆E染色显示，H22肝癌细胞表现出片状或巢状不规则的增长。在对照组中，肿瘤血管丰富，少见核固缩，核碎裂和核凋亡等形态学变化。5-FU组和PESV高、低剂量组显示多个大片状坏死区，大多数肿瘤细胞表现出多种凋亡形态，如核固缩和核碎裂。3．PESV对肿瘤组织中微血管密度的影响CD34表达于肿瘤新生血管内皮细胞的细胞质或细胞膜。以胞浆呈现棕黄色染色为阳性结果。对照组、5-FU组、PESV高、低剂量组的MVD计数分别为7.7±1.4、4.4±1.8、5.3±1.6、5.4±1.5。PESV高、低剂量组的MVD与对照组相比，差异均有统计学意义（P<0.05），这提示PESV可抑制肿瘤血管生成。4．PESV对肿瘤组织中PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α和VEGF-A表达的影响4.1免疫组化法检测结果免疫组织化学染色结果显示，PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、VEGF-A和CD34表达于细胞质或细胞膜，HIF-1α表达于肿瘤细胞的细胞核和细胞质中，均以呈现棕黄色或棕褐色为阳性结果。用Leica Qwin V3图像分析软件进行灰度值分析，与荷瘤对照组相比，PESV高剂量组和低剂量组中PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α和VEGF-A的蛋白表达均降低（P<0.05或P<0.01），且PESV高剂量组和低剂量组相比亦有明显差异（P<0.05）。PI3K与P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.912，P<0.01；r=0.892，P<0.01；r=0.883，P<0.01；r=0.893，P<0.01）。P-Akt与COX-2、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.890，P<0.01；r=0.895，P<0.01；r=0.895，P<0.01）。COX-2与HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.969，P<0.01；r=0.965，P<0.01）。HIF-1α与VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.973，P<0.01）。与荷瘤对照组相比，PESV高剂量组和低剂量组中PTEN的蛋白表达均升高（P<0.05或P<0.01），且PESV高剂量组和低剂量组相比亦有明显差异（P<0.05）。PTEN与PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈负相关（r=-0.895，P<0.01；r=-0.914，P<0.01；r=-0.963，P<0.01；r=-0.972，P<0.01；r=-0.958，P<0.01）。4.2Western blot法检测结果与对照组比较，PESV高、低剂量组PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A表达均减弱。与对照组相比，PESV高、低剂量组PTEN蛋白表达均增强。用ImageJ软件分析显示，PESV高、低剂量组PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A表达均减弱(P<0.05或P<0.01)，且PESV高、低剂量组间差异有统计学意义。而且，PI3K与P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.980，P<0.01；r=0.935，P<0.01；r=0.971，P<0.01；r=0.955，P<0.01）。P-Akt与COX-2、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.931，P<0.01；r=0.950，P<0.01；r=0.961，P<0.01）。COX-2与HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.945，P<0.01；r=0.969，P<0.01）。HIF-1α与VEGF-A的蛋白表达呈正相关（r=0.948，P<0.01）。PESV高、低剂量组PTEN蛋白表达均增强（P<0.05，P<0.01）。且PTEN与PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A的蛋白表达呈负相关（r=-0.972，P<0.01；r=-0.975，P<0.01；r=-0.962，P<0.01；r=-0.968，P<0.01；r=-0.989，P<0.01）。4.3ELISA法检测结果经PESV干预后，PESV高、低剂量组小鼠血清中PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α、VEGF-A的含量均明显低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。PESV高、低剂量组小鼠血清中PTEN的含量明显高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。且PESV高剂量组和低剂量组相比亦有明显差异（P<0.05）结论：1.PESV可抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长，降低肿瘤的体积和重量。2.PESV可影响H22肝癌肿瘤微环境中PTEN、PI3K、P-Akt、COX-2、HIF-1α和VEGF-A的表达，这可能是PESV抗肿瘤血管生成的机制之一。