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目的:考察墨旱莲多糖的免疫活性,并优选墨旱莲多糖提取纯化工艺,为进一步开发墨旱莲药材提供依据。 方法:一、通过墨旱莲多糖对小鼠特异性和非特异性免疫功能的影响,对抗原诱导的循环抗体水平的影响以及对B细胞增殖和功能的影响,来探讨墨旱莲多糖的免疫活性;二、通过正交试验,以多糖得率和含量(或多糖总提取率)为指标考察不同提取方法(水煎煮法、碱提法、酶提法)的最佳条件,并在各自最佳条件下以多糖得率和含量为指标进行比较,得出最佳提取方法;三、主要从两个方面进行研究,第一个方面为脱蛋白方法优选,以多糖保留率和蛋白脱除率为指标,对Sevage法、三氯乙酸法和鞣酸法脱蛋白方法进行比较;第二方面为脱色方法优选,以脱色率和多糖保留率为指标对活性炭脱色、H2O2脱色、树脂脱色法进行比较。通过比较优选出最佳脱蛋白、脱色方法。 结果:一、通过研究发现墨旱莲多糖具有显著的免疫活性:墨旱莲多糖可以显著增加小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬百分率及吞噬指数,其中空白组吞噬百分率和指数为26.0±8.2％,0.223±0.005,多糖组为86.1±4.9%,0.518±0.014;可以显著增加血清中溶血素含量和溶血空斑的形成,其中空白组溶血素含量和溶血空斑形成OD值为0.051±0.012,0.208±0.009,多糖组OD值为0.102±0.008,0.281±0.004;二、通过对提取工艺的比较,得出碱提法为最佳的提取方法;三、通过对纯化方法的比较,优选出Sevage法、H2O2脱色为较好的脱蛋白脱色方法。 结论:明确了墨旱莲多糖的免疫活性;通过对墨旱莲多糖的提取纯化研究,确定了墨旱莲多糖制备工艺为:取墨旱莲药材15g,加入20倍量0.3mol/L的NaOH溶液在90℃水浴条件下,提取4h,连续提取两次,合并两次滤液,调pH至中性,并浓缩至适当体积。在浓缩液中加入其体积20%的Sevage试剂(氯仿:正丁醇=4:1),振摇20min,静置15min至完全分层,离心,去除下层氯仿及中层变性蛋白质,然后调pH值为8,加入脱蛋白后溶液1/5体积的H2O2溶液,50℃水浴脱色30min,脱色后调pH至中性,水浴挥干多余的H2O2,并浓缩至适当体积,80%乙醇醇沉,静置,离心,沉淀依次用无水乙醇,丙酮,无水乙醚洗涤,真空干燥,得除去杂质的墨旱莲多糖。