【摘 要】
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猫泛白细胞减少症是由猫细小病毒（Feline Panleukopenia Virus,FPV）引发的一种高传染性疾病。FPV主要感染猫及其它猫科动物,对伴侣动物和圈养动物行业构成严重的威胁,因此预防FPV的流行具有重要的意义。目前FPV的预防手段主要为灭活和减毒疫苗,它们存在抗原蛋白易变性,毒力返祖及疫苗效力明显不足等局限性。本研究尝试利用大肠杆菌表达FPV VP2蛋白制备病毒样颗粒以解决上述问题
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猫泛白细胞减少症是由猫细小病毒（Feline Panleukopenia Virus,FPV）引发的一种高传染性疾病。FPV主要感染猫及其它猫科动物,对伴侣动物和圈养动物行业构成严重的威胁,因此预防FPV的流行具有重要的意义。目前FPV的预防手段主要为灭活和减毒疫苗,它们存在抗原蛋白易变性,毒力返祖及疫苗效力明显不足等局限性。本研究尝试利用大肠杆菌表达FPV VP2蛋白制备病毒样颗粒以解决上述问题,研究内容如下:首先从Gen Bank获取FPV VP2全基因序列,利用生物信息学软件优化VP2基因,人工合成VP2核酸序列。构建表达载体p ET30a-VP2,将p ET30a-VP2和分子伴侣质粒p TF16共同转入E.coli ER2566细胞中,经SDS-PAGE电泳鉴定,p TF16提高了可溶性蛋白的表达比例。经Western blotting鉴定,VP2蛋白大小为65 ku,具有良好免疫活性。利用硫酸铵对VP2蛋白进行初步纯化,选用15%、20%、25%及30%终浓度的饱和硫酸铵溶液对VP2蛋白进行盐析,经SDS-PAGE电泳鉴定,在饱和硫酸铵终浓度为25%时,杂蛋白被大量去除。VP2蛋白的纯度可达68.78%,利用疏水层析法对VP2蛋白进行进一步精细纯化,在11%-37%B泵洗脱时VP2蛋白被洗脱下来,纯化后的VP2蛋白纯度可达90%,浓度为0.32 mg/m L,血凝效价为213。使用FPV病毒样颗粒疫苗免疫6-8周龄BALB/c小鼠后,采集小鼠血清对血凝抑制（HI）抗体水平和特异性抗体水平进行检测分析,同时观察小鼠体重增长情况。结果表明每组小鼠年龄的增长与体重呈正比。与PBS对照组相比,免疫后1、2周均出现FPV病毒样颗粒特异性结合抗体,免疫后第5周高剂量组产生的最高的效价为1:215。免疫后第2周,均能检测到HI抗体,但效价偏低。第4周后,HI抗体效价上升趋势明显。第5周,抗体效价达到为1:2~9。说明FPV病毒样颗粒能够引发良好的免疫反应。
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