由指状青霉(Penicillium digitatum Sacc)侵染柑橘引起的绿霉病是最严重的柑橘类采后病害,最高可引起90%的采后腐烂损失。在柑橘绿霉病害发生过程中,油胞受损后释放的柠檬烯起到了重要作用,但是具体的作用机制还不清楚。本研究以指状青霉孢子为研究对象,研究了离体和活体条件下柠檬烯对指状青霉生长的影响,并分析了外源柠檬烯的流向。主要研究内容如下:(1)测定了不同数量级(104个/mL、105个/mL、106个/mL、107个/mL)的指状青霉孢子浓度和OD值之间的关系,构建标准曲线,在不同的数量级范围内,其线性关系良好,可以作为后续实验准确定量孢子浓度的依据。(2)测定了水琼脂培养基中添加柠檬烯后对不同浓度孢子萌发率的影响。结果表明:孢子浓度为106个/mL和107个/mL时,柠檬烯在低浓度下(0-0.50μL/mL)促进孢子萌发,高浓度(>1.0μL/mL)下抑制其萌发,最大促进浓度分别为0.25μL/mL和0.50μL/mL。(3)测定了液体培养基(PDB)中添加柠檬烯后对不同浓度孢子萌发率的影响以及萌发率随时间的变化。结果表明:孢子浓度为106个/mL和107个/mL时,柠檬烯在低浓度下(0-0.50μL/mL)促进孢子萌发,高浓度(>1.0μL/mL)下抑制其萌发,最大促进浓度分别为0.25μL/mL和0.50μL/mL。研究还发现,孢子萌发率随时间而增加,11h后萌发完全。(4)探讨了外源添加柠檬烯对柑橘绿霉病进程的影响。结果表明:自然采摘的柑橘果实在划破伤口后第4d开始腐烂,第6d达到98.9%,而没有划破伤口的柑橘以及消毒后的柑橘始终没有出现腐烂现象;柑橘油胞伤口上接种指状青霉孢子并分别培养48h、60h和72h后,柑橘的腐烂直径分别为2.12cm、3.34cm和6.64cm,显著高于划破油胞间隙后的腐烂直径,分别为1.16cm、1.58cm和4.71cm;在划破油胞的柑橘果实上添加5μL 0.25-2.0μL/mL的柠檬烯能加速绿霉病的发病过程,诱导菌斑生长,浓度增加至4.0μL/mL时又抑制其发病;在划破油胞间隙的柑橘果实上添加5μL 0.25-4.0μL/mL的柠檬烯能加速绿霉病的发病过程,诱导菌斑生长,浓度增加为4.0μL/mL时诱导作用开始减弱;随着油胞伤口和油胞间隙伤口添加柠檬烯的浓度增大,两者腐烂直径的差异逐渐缩小,当柠檬烯浓度为2.0μL/mL时,腐烂直径达到最大分别为4.95cm和4.98cm,两者无显著差异。(5)定性分析了柠檬烯在影响孢子萌发过程中的物质变化。结果表明:低浓度下(0-0.50μL/mL)柠檬烯不会转化为其他物质,高浓度下(>1.0μL/mL)有少量转化为α-松油醇。(6)定量分析了柠檬烯促进孢子萌发过程中孢内孢外柠檬烯浓度随柠檬烯初始添加量的变化。结果表明:孢子浓度为106个/mL时,柠檬烯浓度达到0.50μL/mL后,孢内柠檬烯浓度不再增加。孢子浓度为107个/mL时,柠檬烯浓度达到1.0μL/mL后,孢内柠檬烯浓度不再增加。两种孢子浓度下,孢内和孢外柠檬烯浓度之和与初始添加的柠檬烯浓度分别无显著差异。(7)定量分析了0.25μL/mL柠檬烯促进孢子萌发过程中孢内孢外柠檬烯浓度随培养时间的变化。结果表明:孢子浓度为106个/mL时,培养时间达到11h后,孢内柠檬烯浓度不再增加。孢子浓度为107个/mL时,培养时间达到7h后,孢内柠檬烯浓度不再增加。两种孢子浓度下,孢内和孢外柠檬烯浓度之和与初始添加的柠檬烯浓度分别无明显差异。本课题证实了一定浓度柠檬烯可以促进指状青霉孢子萌发并加速柑橘绿霉病的发生,它很可能充当诱导指状青霉分生孢子萌发的信号分子或诱导物,其作为一种营养物质直接促进指状青霉孢子生长的可能性并不大。