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漆酶(EC 1.10.3.2,p-diphenol:dioxygen oxidoreductase)是一种含铜氧化还原酶,它能够催化多种底物并且氧化底物产生的自由基可以进行非酶反应。因此,漆酶在多个工业领域实际应用中显示出巨大的潜力。但细菌漆酶在实际应用中中存在产量低等缺点,为了获得稳定性好及染料脱色效率高的细菌漆酶,对前期筛选的具有漆酶活性的菌株LCO1通过形态特征、生理生化实验和16S rDNA等方法进行鉴定,并进一步研究其生长特性。采用序列分析和生物信息学软件对漆酶的氨基酸组成、分子量、等电点及二级结构等进行分析。通过PCR扩增出漆酶基因并构建重组表达载体pPICZαA-lac,使用毕赤酵母菌株进行高效分泌表达,获得产量较高的漆酶并简化后续纯化工艺。菌株LCO1的16S rDNA序列长度为1512 bp,鉴定该菌株为短小芽孢杆菌Bacillus pumilus LCO1,该漆酶共有510个氨基酸,分子量58.71,二级结构分析发现含有25.88%的延伸链,60.78%的无规则卷曲,5.88%的β-转角和7.45%的α-螺旋。菌株LCO1的最适生长温度为30℃,最适生长的pH为7.0,最适NaCl浓度为5%,该浓度对菌株LCO1生长有一定的促进作用。菌株LCOl芽孢漆酶在培养第3天酶活达到最大值为 450 U/g。重组漆酶表达量在培养7天后达到最高,为1390 U/L。采用DEAE-Sepharose FF离子交换层析和Sephadex G-75凝胶层析对重组漆酶进行分离纯化。纯化后的重组漆酶能够氧化不同的底物,以2,2’-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6磺酸)、丁香醛连氮和2,6-二甲氧基苯酚为底物时的最适pH分别为3.0、6.8和7.4,在中性和碱性条件下稳定性较好,在pH 9.0条件下放置10 d酶活基本没有损失。重组漆酶的最适温度为70℃,在50-80℃保持较高的催化活性。在70℃的半衰期为4 h。重组漆酶在甲醇中稳定性较高,对有其他机溶剂有较好的耐受力。在对RB亮蓝、活性黑5、靛红脱色研究中发现,乙酰丁香酮作为氧化还原介体参与下重组漆酶能够对三种染料有效的脱色降解。对三种染料在pH 9.0时6 h的脱色率达到了 90%、97%、98%。表明该重组漆酶在生物处理染料废水过程中具有潜在应用价值。