MC4R基因多态性及其与湖羊早期生长性状的相关研究

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本研究通过对湖羊早期生长发育规律的研究、同时将MC4R基因作为影响湖羊生长性状的候选基因,利用生物信息学方法,克隆了湖羊黑素皮质素受体-4(melanocortin-4 receptor, MC4R)的DNA序列,在群体范围内进行了PCR-SSCP分析,并对湖羊MC4R单核苷酸多态性及其与早期生长性状之间进行关联分析,筛查与肉用湖羊的早期生长性状相关的分子标记,为肉用湖羊的分子标记辅助育种提供理论基础。一、湖羊早期生长曲线的拟合本试验采用Logistic、Gompertz和Von Bertalanffy三种常用的生长曲线模型对湖羊的早期生长进行拟合,结果以Von Bertalanffy模型对湖羊早期生长发育的拟合效果最好。根据此模型可建立湖羊的早期阶段的生长曲线,为其早期选育和改善饲养管理提供了依据。二、湖羊MC4R基因的克隆及其生物信息学分析本试验克隆得到湖羊MC4R基因全序列,全长1765bp,包括213bp的5’-UTR,999bp的开放阅读框和553bp的3’-UTR,编码332个氨基酸残基,分子量为36.57KDa,等电点为7.09,具有和其他哺乳动物相同的7次跨膜结构域。该蛋白具有较高的保守性,湖羊与牛的MC4R蛋白同源性最高,为95.78%;顺次为犬(91.87%),与人和恒河猴(91.57%)、大鼠(90.96%)和小鼠(90.36%)。试验推定的湖羊MC4R蛋存在多个功能位点或功能基序,与目前研究获得的MC4R的生物学功能是一致的。三、湖羊MC4R PCR-SSCP检测及其多态与生产性状的关联分析试验采用PCR-SSCP的方法对所克隆的湖羊MC4R基因的全序列进行了SNPs检测。试验设计的8对引物中,在M6和M7两对引物扩增序列中检测到了多态性,并均表现为3种基因型。湖羊群体中SNPM6以等位基因B为主,等位基因频率达到0.7361,A等位基因频率仅为0.2639。SNPM7以等位基因C为主,等位基因频率达到0.7292,D等位基因频率为0.2708。χ2适合性检验结果表明,湖羊群体在SNPM6处于Hardy-Weinberg平衡状态(p>0.05),SNPM7则处于非平衡状态(p<0.05)。SNPM6和SNPM7的多态信息含量分别为0.313和0.3169,属中度多态,说明MC4R SNPM6和SNPM7基因标记的遗传变异较大,可望获得更多的选择效果。不同基因型的初生重、断奶重的最小二乘均值及标准误结果表明:SNPM6 AA型的断奶重极显著的高于BB型和AB型(p<0.01),SNPM7DD型断奶重也极显著高于CC型和CD型(p<0.01)。另外,DD型初生重极显著高于CC型(p<0.01),显著高于CD型(p<0.05)。SNPM6A等位基因和SNPM7D等位基因对于湖羊的初生重、断奶重具有正效应;而B等位基因和C等位基因对于湖羊的初生重、断奶重具有负效应。同时相关分析结果表明SNPM6、SNPM7与湖羊断奶重均极显著相关。这表明MC4R可以作为与湖羊生长性状相关的候选基因,并且在今后的湖羊肉用育种工作中可以利用MC4R的SNP进行分子辅助育种,以加快育种进展。
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