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研究目的建立功能性食品等样品中壳聚糖准确定量的方法体系。研究方法壳聚糖在弱酸性溶液中由于质子化而产生氨基阳离子,利用静电引力和疏水作用力与阴离子染料结合成稳定的离子缔合物,根据结合后体系光谱学特征的改变,建立多种共振瑞利散射法和荧光猝灭法定量分析壳聚糖。优化实验条件;探索分子量的影响,并寻找解决解决壳聚糖分子量影响的方法;探索多种共存物质的影响并寻找合适的离子掩蔽剂;利用所建立的共振瑞利散射及荧光猝灭新方法测定样品中壳聚糖含量。并将荧光猝灭法与共振瑞利散射法测定结果相比较。HPLC法先将壳聚糖在氮气保护下水解成氨基葡萄糖,通过测定氨基葡萄糖衍生化产物间接测定壳聚糖含量,并将此结果与紫外分光光地法测得氨基葡萄糖结果相比较。研究结果1、胭脂红、刚果红作探针的共振瑞利散射法测定壳聚糖的含量胭脂红、刚果红与壳聚糖在B-R缓冲溶液体系中结合,能引起溶液的共振瑞利散射(RRS)显著增强。考察了适宜的结合条件、影响因素以及共振瑞利散射与壳聚糖浓度的关系,发现一定浓度的壳聚糖与散射增强(ΔI)成正比。据此,建立了壳聚糖含量的测定的新方法,且方法的灵敏度较高,其中壳聚糖-胭脂红体系检测限0.019μg/mL,刚果红-壳聚糖体系检测限0.044μg/mL。胭脂红作探针的共振瑞利散射法在低浓度时不受壳聚糖分子量的影响。刚果红作探针的共振瑞利散射法不受壳聚糖分子量的影响。用于现有保健药品中壳聚糖和壳聚糖负载镧除氟后水样中壳聚糖的定量分析,结果令人满意。2、水溶性苯胺蓝、萘酚绿b作探针的共振瑞利散射法测定壳聚糖的含量在弱酸性条件下,考察了壳聚糖与水溶性苯胺蓝、萘酚绿b的结合情况,建立了两种水浴条件下大大增强壳聚糖-染料离子缔合物共振瑞利散射强度的新方法。结果显示在适宜的反应条件下,水溶性苯胺蓝、萘酚绿b与壳聚结合形成离子缔合物,能引起溶液的共振瑞利散射(rrs)显著增强。壳聚糖-水溶性苯胺蓝体系在0.01~3.5μg/ml范围内与壳聚糖浓度呈线性关系,其检测限6.94ng/ml。壳聚糖-萘酚绿b体系在0.01~5.5mg/ml范围内与壳聚糖浓度呈线性关系,其检测限8.87ng/ml。更为重要的是,本文研究了壳聚糖分子量对测定结果准确性的影响,发现这两种方法均不受壳聚糖分子量的影响。水溶性苯胺蓝、萘酚绿b作探针的共振瑞利散射法是两种优越的检测方法,有简单、高灵敏度、准确性好的特点。3、壳聚糖-活性红4缔合体系的荧光猝灭与共振瑞利散射光谱研究及其在壳聚糖定量分析中的应用在弱酸性b-r缓冲体系中,壳聚糖对活性红4存在荧光猝灭作用,在λex/λem=285nm/341nm波长处,0.050~2.00μg/ml的浓度范围内,其荧光猝灭程度与壳聚糖浓度呈良好的线性关系。线性方程为:Δf=68.78c+2.648(c,μg/ml),r2=0.9992,检出限为0.039μg/ml。在相同的介质环境下,壳聚糖-活性红4离子缔合体系于λ=342nm有共振瑞利散射特征峰,在0.050~6.00μg/ml的浓度范围内,线性方程为:Δi=681.31c+114.95(c,μg/ml),r2=0.9991,检测限0.033μg/ml。据此,建立了以活性红4为探针定量分析壳聚糖的两种新方法:荧光猝灭法和共振瑞利散射法。同时,将两种方法就壳聚糖分子量对测定结果准确性的影响进行了研究。将两种新方法应用于实际样品的定量检测,测定结果基本一致,且回收率结果令人满意。4、氮气保护下酸水解结合分光光度法、hplc法测定壳聚糖含量本研究以壳聚糖水解液中氨基葡萄糖的产率为指标,在氮气保护的环境下对壳聚糖水解条件进行优化,优选最佳水解条件。tlc结果显示氮气保护下酸水解壳聚糖的最终产物为氨基葡萄糖,且水解时间越长,其产率越高。UV-Vis法测定结果显示,在100℃6 mol/L的HCl中水解54h水解产率更高。比较UV-Vis法和HPLC法对氨基葡萄糖的测定结果,显示HPLC法壳聚糖含量测定结果明显低于UV-Vis法,这可能与HPLC测定的专一性和壳聚糖HCl水解的不完全性有关。结论对比与壳聚糖结合的5种染料,5种染料均是带有多个-SO3-基团和多个刚性平面结构;5种共振瑞利散射法测定样品结果基本一致;活性红4共振瑞利散射法和荧光猝灭法测定样品时所得结果基本一致;提出两种消除壳聚糖分子量影响的方法;比较了HPLC法和紫外分光光度法测定水解后氨基葡萄糖含量,发现HPLC法测得结果偏低,反映出壳聚糖水解尚不彻底,水解方法还有待进一步研究。