大蜡螟幼虫肠道聚乙烯降解菌群的筛选与鉴定

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昆虫在森林生态系统中具有分解者的生态功能,黄粉虫、印度谷螟和大蜡螟在森林生态系统中广泛存在,是森林生态中重要的分解者。昆虫肠道微生物在昆虫取食消化物质、抵抗生物及非生物胁迫中发挥重要作用。近年来,大蜡螟幼虫肠道微生物降解塑料的研究,为难降解农业废弃物的生物治理提供了新思路。本研究主要从以下几个方面开展了研究工作:1.通过特定年龄-龄期两性生命表研究桃小食心虫大规模饲养和收获的最佳卵密度,设计了一种包括不确定因素在内的昆虫大规模饲养和收获体系的两性生命表分析方法,指导大蜡螟的人工饲养,在445cm3体积的饲料接种20粒卵,通过对生命表数据分析,结果表明大蜡螟发育周期明显缩短,繁殖力(F=1868.4)相对较高,因此,根据桃小食心虫密度梯度试验建立的饲养体系可以指导大蜡螟的大规模饲养,以获得大量整齐一致的虫源。2.使用以聚乙烯(PE)为唯一碳源的培养基对健康大蜡螟幼虫肠道微生物进行筛选,筛选到可以降解聚乙烯的混合菌群。通过扫描电镜(SEM)和原子力显微镜(AFM)观察PE膜片表面,发现PE膜片表面形成菌膜,同时变得粗糙、凹陷,说明混合菌群对PE材料具有降解效果;对聚乙烯降解菌群进行16S r DNA鉴定和微生物多样性鉴定,结果表明混合菌群中以不动杆菌属、栖热菌属、贪铜菌属和埃希氏菌-志贺氏菌属为优势物种。4.对塑料降解酶PETase进行组合突变并在毕赤酵母表达体系中进行重组表达,其中突变体PETase-sl(S238F/L88F)对对苯二甲酸双羟乙酯(BHET)的降解效果最佳。
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