研究的背景:肝细胞肝癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）是最常见的肝癌类型,占原发性肝癌病例的75-85%,全球每年约有85万新病例。因发病隐匿、恶性程度高、进展快、易转移且药物敏感度低,患者的预后较差,5年生存率不到20%。尽管手术切除是目前最有效的手段,但大多数HCC在诊断时已经晚期或转移,只有10-20%的患者有手术切除的机会。“癌毒”病机理论是在国医大师周仲瑛教授提出的“癌毒”学说基础上构建的中医肿瘤病机创新理论体系,而消癌解毒方（Xiaoai Jiedu recipe,XJR）是周仲瑛教授根据“癌毒”病机理论创制的有效临床验方,其分子作用机制尚需进一步研究。本文基于基因组学分析其调控的miRNA及下游靶点,探讨消癌解毒方抗肝细胞肝癌的可能作用机制。研究方法:（1）构建H22肝癌荷瘤小鼠模型,分为生理盐水组（阴性对照组）、消癌解毒方低剂量组（XJRL）、消癌解毒方中剂量组（XJRM）、消癌解毒方高剂量组（XJRH）及顺铂组（阳性对照组）。观察各组的疗效,并利用基因芯片技术分析XJR治疗后血液中差异表达的miRNA,并用RT-PCR进行验证。（2）将 miR-200b-3p inhibitor（anti-miR-shRNA）和miR-200b-3p inhibitor NC（NC-shRNA）转染HepG2细胞,采用RT-PCR验证转染后细胞内miR-200b-3p的表达。将细胞分为四组:对照组（空白血清）、消癌解毒方组（XJR含药血清）、anti-miR-shRNA组（anti-miR-200b-3p shRNA质粒处理细胞）、消癌解毒方+anti-miR-shRNA组（XJR含药血清+anti-miR-200b-3p shRNA质粒处理细胞）,通过MTT实验、划痕实验及Transwell实验测定各组细胞的增殖能力、迁移能力及侵袭能力。（3）通过生物信息学分析预测miR-200b-3p的可能作用靶点,通过荧光素酶报告基因检测其活性。通过Western Blot（WB）和RT-PCR进一步验证。研究结果:（1）体外实验显示,消癌解毒方高剂量组能显著抑制肿瘤生长。利用基因芯片技术发现,消癌解毒方高剂量组治疗后血液中有233个差异表达miRNA（75个上调和158个下调）（Fold change＞2 或＜0.5,P-value＜0.05）。通过RT-PCR 验证,miR-453、miR-200b-3p、miR-135a-1-3p、miR-1960（上调）及miR-466f（下调）与芯片结果一致。其中,我们选择miR-200b-3p进行后续研究。（2）体内实验显示,细胞成功转染anti-miR-shRNA和NC-shRNA。消癌解毒方显著抑制了 HepG2细胞的增殖、迁移及转移,而转染anti-miR-shRNA后消除了消癌解毒方对细胞增殖、迁移及转移的抑制作用。（3）利用生物信息学预测Notch1可能是miR-200b-3p的作用靶点。荧光素酶报告显示Notch1是miR-200b-3p的直接作用靶点。通过WB和RT-PCR进一步验证了,消癌解毒方可显著降低了 HepG2细胞中Notch1的表达,而转染anti-miR-shRNA则逆转了消癌解毒方诱导的Notch1表达的降低。结论:（1）消癌解毒方高剂量组能有效地抑制肿瘤生长,且升高血液中miR-200b-3p的含量;（2）消癌解毒方能有效地抑制HepG2细胞增殖、迁移及侵袭,降低细胞中miR-200b-3p的含量可消除XJR的抗肿瘤效应;（3）Notch1是miR-200b-3p的作用靶点,消癌解毒方可能通过miR-200b-3p/Notch1发挥其抗肿瘤作用。