长白山亚种林蛙卵中雌激素的提取与活性研究

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长白山亚种林蛙是中国特有的药用两栖动物,具有极高的营养和药用价值。本文以长白山林蛙卵为原料,分析了林蛙卵中的营养成分,采用超临界CO2萃取及超声波辅助乙醇两种方法对林蛙卵中的雌激素进行了提取研究,并对林蛙卵雌激素进行了分析检测以及活性研究。(1)长白山林蛙卵中的营养成分分析对长白山林蛙卵进行营养成分分析得到水分含量为46.45g/100g、蛋白质34.15g/100g、脂肪6.42g/100g、卵磷脂0.58g/100g、总糖0.88g/100g。(2)长白山林蛙卵雌激素的提取研究通过反复的实验,本文最后采用超临界CO2萃取和超声波辅助乙醇提取法两种方法提取林蛙卵中的雌激素。在超临界CO2萃取林蛙卵雌激素中,对影响萃取得率的萃取压力,萃取温度,CO2流量和萃取时间进行了单因素试验,通过单因素试验确定了超临界萃取林蛙卵雌激素的最佳工艺条件为萃取压力30MPa,萃取温度47℃C02流量为12kg/h,萃取时间为90min。在超声波辅助乙醇提取中分别考察超声提取时间、乙醇浓度、超声功率、提取温度及料液比对雌激素提取率的影响。以单因素实验为基础,确定中心组合实验因子、进行优化试验。对试验结果采用Design-Expert软件,进行二次回归响应面分析,得到最佳工艺条件:提取时间60min;乙醇浓度为80%;超声功率250W;提取温度70℃;料液比1:10。(3)长白山林蛙卵雌激素的分析检测采用高效液相色谱法对林蛙卵雌激素进行了分析,并采用了具有高灵敏性,高特异性,操作简单的酶联免疫法即ELISA试剂盒进行检测,结果表明:超临界C02萃取方法中雌二醇的含量为38.11ng/L,雌三醇含量为26.32ng/L,超声波辅助乙醇提取法得到的雌二醇含量为62.39ng/L,雌三醇含量为18.14ng/L。(4)林蛙卵雌激素的活性研究通过DPPH自由基清除率的测定,超氧阴离子自由基(02-·)清除能力的测定,羟基(·OH)自由基清除率的测定,清除·R能力以及还原能力的测定,对林蛙卵雌激素的体外抗氧化活性进行了分析,同时以不同浓度的Vc作为阳性对照,进行了分析比较,从分析结果中可以得出林蛙卵雌激素具有抗氧化活性,并随着雌激素样品浓度的增加,抗氧化活性也随之增强。
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