小鼠膀胱癌红色荧光移植瘤模型的建立及其荧光影像分析

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研究背景:分子影像学是利用体外成像检测器在细胞和分子层次上对活体动物、模型系统和人体的生物学过程进行定性和定量研究的学科。近几年分子成像技术发展很快,使得对小动物肿瘤模型实时、非侵入在体成像已成为可能。其中活体体内光学成像与传统的检测方法相比具有巨大的优越性,堪称是分子基因检测领域的技术革命,它将荧光蛋白引入靶细胞或者小动物体内,通过活体荧光成像系统在体的、非侵入的、动态地观察生物过程,这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高,不涉及放射性物质,非常安全,目前已广泛应用于肿瘤研究。用红色荧光蛋白(DsRed)作为报告基因,采用脂质体2000介导的基因转染法,将DsRed标记小鼠膀胱癌(BTT739)细胞,建立鼠膀胱癌皮下移植瘤模型,通过MAESTRO活体成像系统在体、非侵入、动态地研究膀胱肿瘤的生物学过程是本实验的目的。目的:探讨红色荧光蛋白(DsRed)标记的小鼠膀胱癌生长转移的分子荧光影像学特征。方法:采用脂质体2000介导的基因转染法,将chickenβ-actin-DsRed-Neo载体转染到小鼠膀胱癌BTT739细胞株;G418筛选后获得稳定表达DsRed的单克隆细胞(BTT739-DsRed);615小鼠24只随机分为三组,后肢皮下注射细胞悬液,第1、2组注射BTT739-DsRed细胞,第3组注射BTT739细胞,建立移植瘤模型;MAESTRO活体成像仪设定激发光波长560-580nm,发射光波长590-610nm,曝光时间5000ms连续观察4周,第2组每周处死小鼠并剖开成像,记录肿瘤生长转移的荧光影像,测定肿瘤大小及荧光信号值;统计分析肿瘤大小与荧光信号值,全身成像与剖开成像之间的关系。结果:1.成功建立小鼠膀胱癌红色荧光移植瘤模型。2. MAESTRO活体成像仪下激发光波长560-580nm,发射波长590-610nm,曝光时间5000ms连续观察四周,第1周观测到发红色荧光的肿瘤,第4周观测到局部淋巴结转移,未见远处转移。3.第1组连续4周测定肿瘤荧光信号值依次为:88.85±17.65、122.26±54.63、133.12±69.06、714.58±342.88counts;肿瘤大小依次为:12.78±4.14、45.07±21.71、82.55±28.98、253.01±67.27mm2;第2组全身成像肿瘤大小4周依次为:11.63±3.27、50.07±23.41、89.76±29.12、289.64±73.56mm2,剖开成像依次:12.24±4.53、72.08±30.12、141.09±43.26、523.89±236.78 mm24.统计分析肿瘤大小与荧光信号强度呈线性正相关(r=0.74,t=3.97,P<0.05),全身成像与剖开成像肿瘤大小呈线性正相关(r=0.97,t=10.00,P<0.05),全身成像测得的肿瘤大小为剖开后成像的70.85±17.13%。结论:小鼠膀胱癌红色荧光移植瘤模型可以直观、连续、敏感的观察肿瘤的生长和转移,随着肿瘤的增大,荧光范围也增大,肿瘤发生坏死后荧光消失,肿瘤发生转移后红色荧光表达亦随之转移。
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