发状念珠藻中MAAs合成条件及性质的研究

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三苯甲咪唑氨基酸(MAAs)是一类存在于多种生物中的,最大吸收峰在310nm-362nm的水溶性化合物,具有紫外吸收、渗透调节、抗氧化等功能。以液体悬浮培养的发状念珠藻细胞为研究对象,模拟野生发状念珠藻的生境条件,探究细胞中MAAs对环境变化的响应。同时测定其还原力、对羟自由基和超氧阴离子的清除能力及紫外吸收的能力,最后对MAAs可能的合成途径进行探讨。主要研究结果如下:1、不同强度的UV-B辐射12h后,发状念珠藻细胞合成MAAs的量达到最大值,且辐射强度为5W/m2时发状念珠藻细胞合成MAAs达到最大值,32.26mg/g。长时间和高强度的紫外辐射后,发状念珠藻细胞合成MAAs的量会减少,MAAs自身也会发生降解。对1W/m2和5W/m2处理12h的发状念珠藻细胞中MAAs进行高效液相色谱分析,谱图显示2、5、8、9峰的峰高和峰面积增大,出现了两个新的峰:峰10和11,6和7两个峰变小或消失。2、用25-600mmol浓度范围的NaCl和NH4Cl处理发状念珠藻细胞,细胞内MAAs的合成量随盐浓度的变化呈现先上升后下降的趋势。NaCl和NH4Cl浓度为50mmol时,MAAs浓度达到最大值,分别为45.09mg/g和35.14mg/g。高效液相色谱分析结果显示图谱第1个峰降低、3和5两个峰消失,NH4Cl处理组中,4、6、7和9四个峰增高;NaCl处理组中,2、6、7和9四个峰增高。3、发状念珠藻细胞中MAAs的合成量因环境温度不同而不同。45℃发状念珠藻细胞合成MAAs的能力变化不大,合成量由19.05mg/g降到16.00mg/g,。4℃,发状念珠藻中MAAs的含量由19.05mg/g降为7.19mg/g。高效液相图谱表明:5℃和45℃处理后的发状念珠藻细胞合成MAAs的能力与空白组相比均有下降的趋势。5℃处理后,1、4、8三个峰降低;45℃处理后,1和8两个峰的峰高降低,且5℃处理组中发状念珠藻细胞合成MAAs的量降低的幅度要大于45℃处理组。4、将发状念珠藻细胞的甲醇提取物进行浓缩、冷冻干燥,得到MAAs粗提物,为白色粉末状固体。对MAAs粗提物的抗氧化能力进行测定。结果表明,MAAs具有一定的抗氧化能力。MAAs粗品的浓度为0.32mg/mL时,溶液体系在700nm处的吸光度值为0.32。样品浓度为7.05mg/mL时,超氧阴离子的清除率为59.01%。羟自由基的清除率在粗品浓度为30.78mg/mL时,达到最大值为78.64%。样品的还原力、对羟自由基和超氧阴离子的清除能力与其浓度成量效关系,随浓度的增加而增大。将MAAs粗提物与防晒系数为20的防晒乳霜按质量比1:1和2:1的比例混合,在280nm-400nm范围内进行光谱扫描。结果表明,防晒霜主要的吸收波长是在280nm-350nm之间。当防晒霜中添加MAAs粗提物后,所测波长范围内都有明显的吸收,表明MAAs粗提物具有紫外吸收能力。5、添加草甘膦的BG-11培养基中,发状念珠藻细胞内MAAs的合成受到抑制。添加芳香族氨基酸的BG-11培养基中,酪氨酸对MAAs合成的抑制作用最明显,其次是色氨酸,而苯丙氨酸对MAAs的合成几乎没有影响。初步推测MAAs可能是由莽草酸途径合成的。三环唑为聚酮途径中酶的抑制剂,在BG-11培养基中添加三环唑,发状念珠藻细胞合成MAAs的能力降低,推测MAAs的基本骨架为环己烯酮,可由聚酮途径合成。
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