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枇杷(EriobotryajaponicaLindl.)是一种原产于我国的亚热带果实,采收时节适逢高温多雨,通常采用0℃贮藏物流以延长果实的贮藏期,但’洛阳青’等红肉品种枇杷果实在低温贮藏物流过程中易出现冷害木质化现象,表现为果实硬度上升、组织褐变、木质素积累等症状,严重影响果实品质和商品性。本研究以’洛阳青’枇杷果实为材料,以果实冷害温度0℃处理作为对照,应用热激(HT)、程序性降温(LTC)等作为延缓低温冷害木质化的处理。基于转录组测序数据分析,结合实时荧光定量、酵母单杂交、双荧光素酶、凝胶迁移(EMSA)等实验技术体系,研究发现PRX参与了枇杷果实木质素积累,同时通过酵母单杂交技术筛选并确定了对其具有直接调控效应的bZIP转录因子。主要结果如下:1、明确了参与枇杷果实冷害木质化进程的PRX成员。基于转录组数据分析和筛选,克隆获得了枇杷果实中的8个PRX成员(其中EjPRX1-EjPRX3的3个成员为非全长序列,EjPRX4-EjPRX8的5个成员为完整编码序列),EjPRX6在HT、LTC处理后表达水平呈现上升趋势,而EjPRX4、EjPRX5、EjPRX7、EjPRX8的表达水平均受到HT处理不同程度的抑制,LTC处理下EjPRX5和EjPRX7的表达较对照下调。基于基因表达丰度(EjPRX5在Od的绝对表达量为EjPRX7的3335倍)和整体表达趋势,选择EjPRX5作为研究枇杷果实冷害木质化机制的候选PRX基因。瞬时过表达EjPRX5的普通烟草(Nicotiana tabacum)叶片中木质素含量较对照明显上升,表明其可促进木质素合成积累。2、筛选并确定了枇杷果实冷害木质化相关的转录因子EjbZIP28。基于酵母单杂交体系,利用EjPRX5的启动子进行文库筛选实验,筛选获得了 EjbHLH17和EjbZIP28两个转录因子。进一步通过双荧光素酶体系验证,发现仅EjbZIP28对EjPRX5的启动子具备2.06倍的转录激活效应,且其基因表达水平受0℃处理诱导并被HT和LTC处理抑制,与EjPRX5的表达模式相一致,但其对低温响应略早于EjPRX5。EMSA实验明确了 EjbZIP28的结合位点为EjPRX5启动子的G-box元件。结合以上实验证据,推测低温处理可能通过诱导EjbZIP28的表达,进而转录激活EjPRX5的启动子,从而实现对果实木质化进程的调控。综上所述,本研究鉴别了枇杷果实冷害木质化相关的关键PRX成员EjPRX5,并明确了 EjbZIP28转录因子可转录激活EjPRX5启动子,发现了低温调控枇杷果实木质素单体聚合的新通路。