家蚕“明”死卵突变体l-em与野生型间卵巢的差异表达基因研究

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家蚕“明”死卵突变体(lethal egg of “ming”, l-e~m)产下的卵在很短时间内即发生失水致死,已研究显示导致该现象是由BmEP80突变引起的。卵黄膜蛋白BmEP80为家蚕卵巢结构蛋白,本课题以l-e~m为材料,采用数字基因表达谱技术研究卵巢差异表达基因,以期为阐明家蚕卵子发生机制奠定基础。1.野生型与l-e~m突变体间卵巢差异表达基因的研究通过对野生型和l-e~m突变体蛹期第6日卵巢的数字基因表达谱(Digital geneexpression, DGE)研究,分别获得3,463,495和3,607,936个清洁标签(clean tag),两者间存在239个差异表达基因,在l-e~m突变体中,有181个基因显示上调,58个下调,仅在l-e~m突变体中表达的基因有34个,仅在野生型中表达的基因有5个。KEGGpathway分析显示,在134个KEGG路径中,没有发现显著富集的pathway,在相对富集的前5个pathway中,共有3个与蛋白质合成有关。同时,分析了19.5kDa热激蛋白(19.5kDa heat shock protein, HSP19.5)基因、卵黄膜蛋白基因BmVMP30等8个显著差异表达基因的表达谱,其中Hsp19.5在野生型中维持高表达,而在突变体中不表达。2.昆虫激素诱导下Hsp19.5和BmEP80的表达研究。激素调节在家蚕卵巢发育中发挥重要作用,为了探索昆虫激素对Hsp19.5和BmEP80影响作用,对野生型和l-e~m突变体分别添食蜕皮激素(Molting hormone, MH)、保幼激素(Juvenile hormone, JH)和注射滞育激素(Diapause hormone, DH),分析了Hsp19.5和BmEP80激素处理前后表达的变化。结果显示,MH和DH可以诱导卵黄膜蛋白BmEP80上调表达。Hsp19.5的表达量在MH诱导的野生型中显示上调,在JH诱导下的表达量显示下调,而滞育激素对其诱导性不明显。在l-e~m突变体中,Hsp19.5不受MH、JH和DH诱导。本论文研究了野生型与l-e~m突变体间的差异表达基因的研究,为进一步阐明卵子发生机制提供了理论依据。
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