目的:研究癌相关成纤维细胞(CAF)对乳腺癌细胞迁移功能的影响及其分子机制。方法:采用生物信息学手段分析课题组前期MCF-10A/Twist和MCF-10A/Vector细胞的mRNA与蛋白芯片数据,研究整合素家族的表达情况。运用qRT-PCR法检测ITGB3基因在正常乳腺组织、原位导管癌、浸润性乳腺癌和转移性乳腺癌临床样本中的表达。利用qRT-PCR和western blot的方法筛选内源性高表达ITGB3基因的乳腺癌细胞系。将ITGB3-sh RNA包装到慢病毒中,构建稳定干扰ITGB3基因表达的BT549、Hs578T细胞模型,并利用qRT-PCR和western blot验证ITGB3的表达。Transwell法检测ITBG3稳定干扰细胞模型的迁移能力的改变。将稳定干扰ITGB3的细胞分别与NF、CAF进行共培养,Transwell法和划痕实验检测其迁移能力的改变。在MCF-7和SK-BR-3细胞中过表达ITGB3,采用western blot进行验证。将过表达ITGB3基因的细胞与NF、CAF进行共培养,Transwell法检测其迁移能力的改变。分析前期NF与CAF mRNA芯片数据,筛选出其中差表达的分泌因子,并用qRT-PCR和ELISA验证芯片结果。用Kaplan-meier法分析分泌因子CCL18的表达与乳腺癌预后的关系。qRT-PCR检测从临床乳腺癌样本中分离出的nf及caf中ccl18的表达情况。co-ip检测ccl18与itgb3相互作用的情况。利用sirna干扰caf中ccl18的表达,采用qrt-pcr、westernblot和elisa法进行验证。干扰ccl18的caf与干扰itgb3的细胞模型进行共培养,transwell法检测细胞迁移能力的变化。在caf的无血清条件培养基中加入ccl18的中和抗体,再与稳定干扰itgb3的细胞共培养,transwell检测细胞迁移能力的改变。将分泌因子ccl18直接与itgb3干扰细胞模型共培养,transwell法检测细胞迁移能力的变化。利用westernblot检测ccl18作用于itgb3后所激活的下游信号通路和迁移相关蛋白e-cadherin及vimentin的表达。ccl18作用于bt549细胞,同时抑制下游信号通路p38/mapk的活化,transwell检测细胞迁移能力的变化,westernblot检测e-cadherin及vimentin的表达情况。结果:整合素家族在mcf-10a/twist细胞中表达异常,itgb3基因在乳腺癌临床样本中的表达水平随着肿瘤恶性程度的增加而升高。bt549、hs578t是内源性高表达itgb3的细胞系,mcf-7、sk-br-3是低表达itgb3的细胞系。成功构建itgb3稳定干扰的bt549、hs578t细胞模型和itgb3过表达的mcf-7、sk-br-3细胞模型。caf能够促进itgb3阳性表达的乳腺癌细胞迁移,但nf无该现象。caf异常高表达的分泌因子ccl18,其表达水平与乳腺癌的不良预后成正相关。临床样本显示caf中ccl18的表达水平明显高于nf并且ccl18能够与itgb3发生相互作用。caf中干扰ccl18表达或者caf条件培养基中加入ccl18中和抗体后,caf促itgb3阳性表达细胞的迁移能力降低。ITGB3阳性表达的细胞中加入CCL18,细胞的迁移能力上调。CCL18作用于ITGB3后激活下游p38/MAPK信号通路,并且抑制E-cadherin表达,促进Vimentin表达。结论:CAF能够产生分泌因子CCL18,CCL18能够作用于integrinβ3,并活化下游p38/MAPK信号通路,抑制E-cadherin表达,促进Vimentin表达,从而促进乳腺癌细胞的迁移。