褐飞虱RNAi防治候选靶标-NlFoxN1基因分析与功能研究

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褐飞虱(Nilaparvata lugens),是半翅目(Hemiptera)飞虱科(Delphacidae)的一种小型昆虫,单食性,只能在水稻或者普通野生稻上面进行取食和后代繁殖,是我国和许多东南亚国家水稻作物的首要害虫,在粮食生产上造成了巨大损失。Fox转录因子通过多种分子机制对靶基因进行调控,对生物体的新陈代谢、细胞增殖、细胞凋亡、器官发育、胚胎形成、组织分化以及氧化应激等方面起着重要作用。因此,阐明褐飞虱Fox家族的功能及调控机制,可以为害虫防治提供重要的理论依据。本研究通过克隆得到褐飞虱FoxN亚家族的NlFoxN1基因,其开放阅读框ORF为1911bp,编码636个氨基酸,蛋白分子量预计为69.9kDa。结构域预测发现蛋白有Fox家族典型的Forkhead(FH)保守结构域,即Fox蛋白的DNA结合区。同源性分析发现不同昆虫在FoxN蛋白的FH结构域上保持着高度的一致性。通过qRT-PCR技术,分别测得了NlFoxN 基因在褐飞虱不同发育时期以及不同组织中的相对表达量,得到了该基因的时空表达模式,发现该基因分别在胚胎期和卵巢组织中表达量最高。利用RNAi技术干扰了 NlFoxN1基因的表达,发现该基因沉默后褐飞虱卵的孵化率显著降低,而卵巢发育和产卵量并没有变化,同时发现5龄若虫在羽化为成虫时死亡率显著增大。说明该基因可以调控褐飞虱卵的胚胎发育以及若虫的羽化过程。本研究对褐飞虱NlFoxN1基因分析与功能的初步探究,加深了对Fox转录因子调控生物体生长发育机制的分子认识,有望作为褐飞虱RNAi防治候选靶标,在褐飞虱的综合治理和有效防治方面具有潜在的应用价值。
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