论文部分内容阅读
玫瑰（Rosa rugosa）又称赤蔷薇，穿心玫瑰，徘徊花等，是蔷薇科落叶灌木，性甘味温，营养成分丰富。本课题采用水和70%的乙醇两种溶剂对玫瑰花中的总黄酮进行粗提取，并对两种溶剂提取的玫瑰类总黄酮进行抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗菌以及平衡肠道菌群等生物活性的研究，并将其抗氧化、抗菌的生理活性应用于食品保鲜上。
（1）玫瑰类总黄酮的提取条件及含量。实验所采用的提取条件为1:10的料液比在40℃下水浴浸提2h。经过冷冻干燥处理得到水提玫瑰黄酮粗提物（RFW）的提取率为24.70%，醇提玫瑰黄酮粗提物（RFE）的提取率为28.34%。其中RFW中的黄酮含量为47.82±0.152mg RE/g，RFE中的黄酮含量为79.08±0.195mg RE/g。
（2）玫瑰类总黄酮的抗氧化活性。以芦丁为阳性对照评价了RFW与RFE的总还原性、DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率以及超氧阴离子（O2-）自由基的清除能力。RFW和RFE对ABTS的IC50分别为0.018mg/mL和0.017mg/mL，二者差距较小；RFW和RFE对DPPH的IC50分别为0.033mg/mL和0.021mg/mL；RFW和RFE对超氧阴离子自由基的IC50分别为0.100mg/mL和0.094mg/mL。总体来看，RFW与RFE对三种自由基的整体清除能力均为ABTS>DPPH>O2-，RFE对自由基的整体清除能力要优于RFW。
（3）玫瑰类总黄酮的抗衰老活性。利用隐杆秀丽线虫建立抗衰老生物模型，通过对隐杆秀丽线虫的生命周期、头部摆动频率、身体伸缩频率、咽泵速率、排泄周期、氧化应激以及线虫体内的抗氧化酶活性等指标，判断玫瑰类黄酮对秀丽线虫的抗衰老活性。结果显示：浓度为2.0mg/mL的RFW与RFE是能够延长线虫寿命的最佳作用浓度，均可使线虫的寿命延长至20d，其半数致死天数分别为12.64d和10.44d；氧化应激结果显示2mg/mL与4mg/mL的RFE可延长线虫寿命至40h；2mg/mL与4mg/mL的RFW可将线虫寿命延长至36h。抗氧化酶活性测试显示RFW和RFE可以提高秀丽线虫体内SOD与CAT的活性，从而发挥抗衰老作用。
（4）玫瑰类总黄酮的抗肿瘤活性。培养人肝癌细胞HepG2细胞系，以甲氨蝶呤为阳性对照，将RFW与RFE作用于人肝癌HepG2细胞，利用MTT法进行抑制率测定，并对其细胞形态、细胞迁移率、细胞侵袭率、细胞凋亡以及蛋白表达进行测定。结果显示：低浓度玫瑰黄酮（10-40μg/mL）可以抑制HepG2细胞的迁移和转移；高浓度玫瑰黄酮（40-160μg/mL）可通过上调促凋亡蛋白p53和Bax的表达，下调抗凋亡蛋白bcl-2、caspase3、caspase9的表达等途径破坏甚至杀死HepG2细胞，从而促进HepG2细胞的凋亡。
（5）玫瑰类总黄酮对肠道菌群的影响。将RFW与RFE作用于八种常见的肠道菌，通过对益生菌生长曲线、产酸能力以及对致病菌抑制率的测定判断玫瑰类黄酮对肠道菌群的影响。结果显示：RFW对副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌以及两岐双歧杆菌均有较好的促进生长繁殖的作用，可以加快其到达培养终点的时间；RFE对保加利亚乳杆菌和两岐双歧杆菌有较好的促进生长的作用。RFW与RFE对金黄色葡萄球菌的抑制作用优于大肠杆菌，RFE效果优于RFW；
（6）玫瑰花总黄酮对食品保鲜的应用。以山梨酸钾（PS）为阳性对照将RFW与RFE应用于鲜豆浆与鲜橙汁中，通过对菌落总数、pH值以及感官评价等指标判断了RFW与RFE的保鲜作用。结果显示，RFW与RFE具有一定的抑菌性，能有效抑制食品中的微生物滋长，防止酸败。RFE由于微溶于水溶剂，在饮品中容易析出也影响了其状态的稳定性。而RFW既可以有效防止微生物滋长又能增加饮品香气同时保持其状态的稳定。
（7）玫瑰固体饮料的研制。以玫瑰水浸液为主原料，银耳浸提液为辅料，白砂糖、柠檬酸、麦芽糊精、柠檬酸钠为配料研制了一款固体饮料。通过单因素正交实验确定了最佳配方为玫瑰浸提液冻干粉与银耳浸提液冻干粉搭配比例为4:1，总量为3g，白砂糖10g，柠檬酸0.1g，柠檬酸钠和麦芽糊精分别按照1%和10%添加，以500mL温开水冲泡，感官评分为95.33分。
（1）玫瑰类总黄酮的提取条件及含量。实验所采用的提取条件为1:10的料液比在40℃下水浴浸提2h。经过冷冻干燥处理得到水提玫瑰黄酮粗提物（RFW）的提取率为24.70%，醇提玫瑰黄酮粗提物（RFE）的提取率为28.34%。其中RFW中的黄酮含量为47.82±0.152mg RE/g，RFE中的黄酮含量为79.08±0.195mg RE/g。
（2）玫瑰类总黄酮的抗氧化活性。以芦丁为阳性对照评价了RFW与RFE的总还原性、DPPH自由基清除率、ABTS自由基清除率以及超氧阴离子（O2-）自由基的清除能力。RFW和RFE对ABTS的IC50分别为0.018mg/mL和0.017mg/mL，二者差距较小；RFW和RFE对DPPH的IC50分别为0.033mg/mL和0.021mg/mL；RFW和RFE对超氧阴离子自由基的IC50分别为0.100mg/mL和0.094mg/mL。总体来看，RFW与RFE对三种自由基的整体清除能力均为ABTS>DPPH>O2-，RFE对自由基的整体清除能力要优于RFW。
（3）玫瑰类总黄酮的抗衰老活性。利用隐杆秀丽线虫建立抗衰老生物模型，通过对隐杆秀丽线虫的生命周期、头部摆动频率、身体伸缩频率、咽泵速率、排泄周期、氧化应激以及线虫体内的抗氧化酶活性等指标，判断玫瑰类黄酮对秀丽线虫的抗衰老活性。结果显示：浓度为2.0mg/mL的RFW与RFE是能够延长线虫寿命的最佳作用浓度，均可使线虫的寿命延长至20d，其半数致死天数分别为12.64d和10.44d；氧化应激结果显示2mg/mL与4mg/mL的RFE可延长线虫寿命至40h；2mg/mL与4mg/mL的RFW可将线虫寿命延长至36h。抗氧化酶活性测试显示RFW和RFE可以提高秀丽线虫体内SOD与CAT的活性，从而发挥抗衰老作用。
（4）玫瑰类总黄酮的抗肿瘤活性。培养人肝癌细胞HepG2细胞系，以甲氨蝶呤为阳性对照，将RFW与RFE作用于人肝癌HepG2细胞，利用MTT法进行抑制率测定，并对其细胞形态、细胞迁移率、细胞侵袭率、细胞凋亡以及蛋白表达进行测定。结果显示：低浓度玫瑰黄酮（10-40μg/mL）可以抑制HepG2细胞的迁移和转移；高浓度玫瑰黄酮（40-160μg/mL）可通过上调促凋亡蛋白p53和Bax的表达，下调抗凋亡蛋白bcl-2、caspase3、caspase9的表达等途径破坏甚至杀死HepG2细胞，从而促进HepG2细胞的凋亡。
（5）玫瑰类总黄酮对肠道菌群的影响。将RFW与RFE作用于八种常见的肠道菌，通过对益生菌生长曲线、产酸能力以及对致病菌抑制率的测定判断玫瑰类黄酮对肠道菌群的影响。结果显示：RFW对副干酪乳杆菌、嗜酸乳杆菌、乳双歧杆菌以及两岐双歧杆菌均有较好的促进生长繁殖的作用，可以加快其到达培养终点的时间；RFE对保加利亚乳杆菌和两岐双歧杆菌有较好的促进生长的作用。RFW与RFE对金黄色葡萄球菌的抑制作用优于大肠杆菌，RFE效果优于RFW；
（6）玫瑰花总黄酮对食品保鲜的应用。以山梨酸钾（PS）为阳性对照将RFW与RFE应用于鲜豆浆与鲜橙汁中，通过对菌落总数、pH值以及感官评价等指标判断了RFW与RFE的保鲜作用。结果显示，RFW与RFE具有一定的抑菌性，能有效抑制食品中的微生物滋长，防止酸败。RFE由于微溶于水溶剂，在饮品中容易析出也影响了其状态的稳定性。而RFW既可以有效防止微生物滋长又能增加饮品香气同时保持其状态的稳定。
（7）玫瑰固体饮料的研制。以玫瑰水浸液为主原料，银耳浸提液为辅料，白砂糖、柠檬酸、麦芽糊精、柠檬酸钠为配料研制了一款固体饮料。通过单因素正交实验确定了最佳配方为玫瑰浸提液冻干粉与银耳浸提液冻干粉搭配比例为4:1，总量为3g，白砂糖10g，柠檬酸0.1g，柠檬酸钠和麦芽糊精分别按照1%和10%添加，以500mL温开水冲泡，感官评分为95.33分。