【摘 要】
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背景和目的:内皮细胞源性分泌因子通过影响其他细胞的行为而在维持机体稳态中发挥关键的作用。当这些因子失调时,可能会导致机制生理完整性受到破坏,并促进许多不同组织和器官的疾病发生。腹主动脉瘤（AAA）是一种影响人类健康的退行性疾病,对于他的很多发病机制目前尚不清楚。在目前研究中,我们探讨了内皮细胞中的一种染色质重塑蛋白（Brahma-related gene 1,Brg1）的靶向缺失如何影响由血管紧张
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背景和目的:内皮细胞源性分泌因子通过影响其他细胞的行为而在维持机体稳态中发挥关键的作用。当这些因子失调时,可能会导致机制生理完整性受到破坏,并促进许多不同组织和器官的疾病发生。腹主动脉瘤（AAA）是一种影响人类健康的退行性疾病,对于他的很多发病机制目前尚不清楚。在目前研究中,我们探讨了内皮细胞中的一种染色质重塑蛋白（Brahma-related gene 1,Brg1）的靶向缺失如何影响由血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠AAA的发病机制。实验方法:通过将纯合的ApoE-/-小鼠与Brg1基因敲除小鼠进行配繁杂交,从子代中获得纯合稳定的Brg1;ApoE基因双敲除（DKO）小鼠,进行后续实验分组研究。通过AngⅡ诱导AAA小鼠模型,将8～10周龄的雄性ApoE-/-小鼠10只和8～10周龄的雄性（DKO）小鼠,喂养1周适应后分别分为WT组和KO组2组,每组10只。首先提前配置好Ang II微型渗透泵:将Ang II粉末溶解于无菌0.9%盐水中,并根据动物体重（200ng/kg/min输注速率,持续28天）装入泵中,并且现配现用。在WT组和KO组小鼠背部肩胛间皮下手术植入已预装AngⅡ的缓释泵,持续释放AngⅡ（1000ng·kg-1·min-1）,术后饲养4周。四周后应用多普勒超声仪检测小鼠血管直径的改变;摘取血管,拍照并进行组织学分析。血管组织经脱水、包埋、切片处理后,进行弹性纤维染色（Elastic tissue fiber Van Gieson,EVG）及HE染色,染色后用倒置显微镜进行镜下拍照分析,观察WT组与KO组之间血管壁的破坏程度,并进行组织学分析和统计。主要结果:1.ApoE-/-;Brg1（DKO）基因双敲除（DKO）小鼠模型的构建情况1.1小鼠的基因型鉴定结果:F2代时,所得子代小鼠中12号小鼠为ApoE基因缺失,且Brg1基因也缺失,因此这只小鼠为ApoE-/-;Brg1双敲除（DKO）小鼠。通过鉴定,确定ApoE-/-;Brg1（DKO）小鼠构建成功。1.2 ApoE-/-;Brg1（DKO）小鼠繁育结果:后代中可以较稳定的保持杂交所产生的稳定基因型,为实验小鼠模型提供保障。2.内皮特异性Brg1基因的缺失对AngⅡ诱导的ApoE-/-小鼠腹主动脉瘤的解剖学的影响:小鼠解剖取出腹主动脉,评估显示WT组小鼠腹主动脉明显增大,提示有AAA的发生。相比之下,KO组小鼠主动脉的扩张显著下降,且AAA的发生率要低于WT组。3.内皮特异性Brg1基因的缺失对AngⅡ诱导的ApoE-/-小鼠腹主动脉瘤在超声心动图测量血管直径的影响:WT组小鼠比KO组小鼠的血管直径要明显增大,统计图为两组小鼠血管直径的统计分析,可以看出KO组小鼠导致的主动脉直径相比于WT组而言,直径减值约为11%（*P<0.05）。4.内皮特异性Brg1基因的缺失对AngⅡ诱导的ApoE-/-小鼠腹主动脉瘤对血管染色的影响4.1对HE染色的影响:染色实验结果可以看出,KO组小鼠相比于WT组小鼠血管中间层的破坏程度明显减轻。4.2对血管弹性纤维染色的影响:染色结果显示:KO组小鼠相比于WT组小鼠的弹性纤维蛋白完整性要好得多;病理分级也提示WT小鼠的弹性蛋白断裂比KO小鼠更严重,弹性纤维蛋白的统计分析表明,KO组小鼠的弹性纤维蛋白破坏程度相比于WT组要明显减轻（*P<0.05）。结论:我们的结果表明:通过杂交手段,在F2代小鼠中成功繁育出ApoE-/-;Brg1双敲除（DKO）小鼠,为后续的实验提供了有力的保障。在由AngⅡ诱导的ApoE-/-小鼠腹主动脉瘤（AAA）模型中,内皮细胞Brg1基因条件性缺失可以降低AAA的发生率,减轻主动脉直径的扩张,以及减轻血管纤维蛋白的损伤程度,从而延缓AngⅡ诱导ApoE-/-小鼠AAA的发生发展。所以从表观遗传学的角度可以得出Brg1基因可能对AAA的形成有着一定的密切关系,且可能是促进其发展的作用。其中具体的发病机制还有待进一步的研究证实。
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