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第一部分:VEGF-C与COX-2反义寡合苷酸联合对乳腺癌细胞VEGF-C的表达的影响目的探讨以阳离子脂质体为载体联合转染VEGF-C与COX-2基因反义寡核苷酸(ASODN)对人乳腺癌细胞MDA-MB-231中VEGF-C蛋白及其mRNA表达的抑制作用。方法分别以VEGF-C及COX-2基因为靶点合成反义寡核苷酸,同时合成相应的正义寡核苷酸(SODN)作为对照,以阳离子脂质体为载体联合转染人乳腺癌细胞MDA-MB-231。MTT法探讨反义寡合苷酸对细胞的毒副作用及最佳药效浓度;免疫细胞化学及激光共聚焦检测联合转染VEGF-C与COX-2 ASODN后乳腺癌细胞VEGF-C蛋白的表达;RT-PCR检测联合转染后对乳腺癌细胞中VEGF-C mRNA表达的影响。结果ASODN/LIP以浓度0.2mmol/2.5ml/L转染细胞时细胞无明显毒副作用;联合组对VEGF-C mRNA的抑制率为70.37%,而单用VEGF-C及COX-2 ASODN组分别为48.15%及42.21%,联合组的抑制率显著高于单用ASODN组(P<0.01);COX-2、VEGF-C在乳腺癌细胞MDA-MB-231中的平均光密度AOD值分别为0.304±0.072,0.249±0.012;ASODN COX-2组及联合组中COX-2蛋白表达较对照组降低(P<0.01),而VEGF-C ASODN组中COX-2的表达无明显变化(P>0.05);联合组乳腺癌细胞中VEGF-C的蛋白表达明显低于单用VEGF-C及COX-2 ASODN组(P<0.01)。结论COX-2及VEGF-C的反义寡核苷酸序列较特异,能够降低相应基因的表达。单独转染VEGF-C与COX-2 ASODN及联合转染VEGF-C与COX-2 ASODN均可降低乳腺癌细胞MDA-MB-231中VEGF-C的蛋白及mRNA水平,但以联合组降低更明显。COX-2可能参与并诱导乳腺癌细胞VEGF-C的表达。第二部分:VEGF-C与COX-2反义寡合苷酸联合对裸鼠乳腺癌淋巴管生成的影响目的建立BALB/c裸鼠乳腺癌模型,观察联合转染VEGF-C与COX-2 ASODN对乳腺癌组织中COX-2及VEGF-C的影响和对乳腺癌组织中淋巴管生成的抑制作用。方法建立BALB/c裸鼠乳腺癌模型,实验分为对照组、VEGF-C ASODN、COX-2 ASODN及VEGF-C与COX-2 ASODN联合组。采用免疫组化学SP法检测各组裸鼠乳腺癌组织中COX-2及VEGF-C的蛋白表达。用RT-PCR检测联合转染后对各组裸鼠乳腺癌组织中COX-2及VEGF-C mRNA表达的影响;通过淋巴管特异性标记物D2-40记数淋巴管密度,检测ASODN对乳腺癌组织中LVD的影响。结果对照组、VEGF-C ASODN组、COX-2 ASODN组及联合组中VEGF-CmRNA分别为0.818±0.114、0.406±0.075、0.442±0.078及0.280±0.067;蛋白表达量分别为0.316±0.079、0.157±0.034、0.164±0.042及0.125±0.021;LVD分别为11.600±2.753、6.400±2.716、7.450±2.183及5.000±2.195。单用及联合ASODN均能抑制VEGF-C在基因水平和蛋白水平的表达,也能抑制淋巴管的生成。但联合组的抑制作用明显高于单用组( P<0.01 ); VEGF-C的表达与LVD呈正相关(r=0.757,p<0.01)。结论联合VEGF-C与COX-2 ASODN能降低乳腺癌裸鼠移植瘤中VEGF-C的表达,也能明显抑制乳腺癌淋巴管生成。