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本文以诺氟沙星为研究对象,并合成了诺氟沙星的半抗原(NFLX-Hp),经过提纯后用红外吸收光谱,质谱和核磁共振图谱来测定半抗原的结构。采用活性酯法将半抗原与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)共价偶联,制备人工抗原和包被原,经紫外扫描确定偶联情况并计算半抗原与载体蛋白的结合比。以NFLX-Hp-BSA为免疫原免疫新西兰白兔,制备针对半抗原的特异性抗血清。间接ELISA法测定抗血清的中点效价达6.4×104,双向琼脂扩散法测定抗血清的效价达1/64。兔颈动脉放血得抗血清,以硫酸铵分步盐析法分离纯化抗血清中的抗体并冻干,-20℃保存。采用活性酯法制备酶标半抗原(NFLX-Hp-HRP),透析去除游离半抗原等小分子,再经Sephadex柱纯化;酶标半抗原既保持了免疫化学活性,又保持了酶活性,可用于免疫化学分析。进一步研究了pH值、离子强度和有机溶剂(甲醇、乙腈、丙酮)对包被抗体-酶标半抗原(E-H)直接竞争ELISA法的影响。结果表明:当包被介质的pH值为6.2时,固相载体对抗体的吸附性最好;当反应介质的pH值同样为6.2时,抗体与诺氟沙星的亲和作用最强。离子强度在一定范围内增大会提高抗体与诺氟沙星的亲和力;甲醇、乙腈和丙酮含量大于5%影响诺氟沙星的免疫分析结果。成功建立了诺氟沙星直接竞争酶联免疫吸附分析法,方阵试验确定了抗体的最佳包被浓度为10μg/mL,酶标半抗原最佳稀释度为16000倍。在优化条件下,建立了诺氟沙星的标准抑制曲线,回归方程I = 16.17LogC + 67.57,r2 = 0.978 ,线性范围为100～0.01μg/mL,抑制中浓度(IC50)为0.082μg/mL,IC20为1.14ng/mL,相对标准偏差(RSD)=8.33(n=5)。抗体的特异性考察结果表明,半抗原的交叉反应率最大为38139.535,左氧氟沙星(Levofloxacin)、环丙沙星(Ciprofloxacin)、洛美沙星(Lomefloxacin)的交叉反应率分别为8.884、3.306和0.869。在空白鸡血清中分别添加诺氟沙星标样,使样品中诺氟沙星的含量分别为0.5 mg/kg和5mg/kg两个水平。添加样品用1.0mol/mL的盐酸提取,E-H直接竞争ELISA法测定,重复4次。诺氟沙星添加浓度为0.5 mg/kg时,回收率86.34%～107.40%,平均值为97.285%,回收率的相对标准偏差(RSD)为8.86;诺氟沙星添加浓度为5 mg/kg时,回收率81.11%～101.91%,平均值为93.035%,回收率的相对标准偏差(RSD)为9.53。说明E-H直接竞争ELISA法能满足诺氟沙星残留分析的要求。