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随着人工授精技术的发展,对猪精子的需求越来越多,但猪精子由于其细胞中含有大量不饱和脂肪酸的特殊性,难以在生产中广泛应用,因此需要在猪精子中添加抗氧化剂,提高精子的品质。丹参酮IIA、灵芝多糖和芦丁均为天然有效的抗氧化剂,未应用到猪精子的保存研究中。本试验采用长白公猪的精液为试验对象,添加不同浓度的丹参酮IIA、灵芝多糖和芦丁在猪精子的稀释液中,经过17℃常温保存和冷冻-解冻后使用显微镜以及计算机辅助精子分析仪(Computer-aided Sperm Analys,简称CASA)辅助检测精子的活力,低渗肿胀试验检测精子的质膜完整性,异硫氰荧光素标记的花生凝集素(FITC-PNA)检测精子的顶体完整性,罗丹明123(Rh123)和碘化丙啶(PI)检测精子的线粒体活性,酶活性试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD酶)、过氧化氢酶(CAT酶)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px酶)等抗氧化酶活性,荧光探针DCFH-DA检测ROS含量,脂质氧化试剂盒检测MDA水平。最后选取添加抗氧化剂使得冷冻解冻后精子品质较好的芦丁试验组,进行体外受精试验。获得如下结果:1.在猪精子常温稀释液中,添加一定浓度丹参酮IIA,在保存第6 d可以显著提高精子的活率、质膜完整性和顶体完整性(P<0.05)。当丹参酮IIA的添加浓度为0.9mM时,对精子的活率和顶体完整率具有积极作用,分别达到了51.43±0.91%和58.20±1.13%。2.在猪精子冷冻稀释液的中,添加1.2mM的丹参酮IIA,可以显著增强精子的活力(60.36±1.97%)、活率(53.38±3.64%)、线粒体活性和顶体完整率,显著降低MDA含量和提高抗氧化酶中SOD酶活性和GSH-Px酶活性(P<0.05)。但丹参酮IIA的添加在精子质膜的完整性保护和增强CAT酶的活性方面并没有发挥作用。3.在猪精子常温稀释液中,添加灵芝多糖,可以提升精子的品质。当添加0.4mg/mL灵芝多糖,在保存第6 d,精子的活率显著提高,顶体完整性也明显改善(P<0.05)。但在精子质膜保护方面,添加0.2-0.4mg/mL灵芝多糖可以显著增进质膜完整性。4.在猪精子冷冻稀释液中,添加0.8mg/mL的灵芝多糖,可以显著促进解冻后精子的活力、质膜完整性、顶体完整性和抗氧化酶CAT和GSH-Px活性(P<0.05),但在提高线粒体活性方面并没有显著作用。此外,添加0.4-0.8mg/mL的灵芝多糖可以显著增进SOD酶活性并降低MDA含量(P<0.05)。5.在猪精子常温稀释液中,添加一定浓度的芦丁,可以提升精子的活率、质膜完整性和对顶体完整性(P<0.05),当添加0.4mM的芦丁时,其保存效果最好。6.在猪精子冷冻稀释液的中,添加0.6 mM的芦丁,可以显著改善解冻后精子运动能力,提高精子的生理特征(P<0.05),显著降低精子发生脂质过氧化反应(P<0.05)。而在体外受精方面,添加0.6mM芦丁,显著提高总有效受精率(P<0.05)。综上,添加抗氧化剂丹参酮IIA、灵芝多糖和芦丁在猪精子的常温保存稀释液中可显著增强精子的活率,提高质膜和顶体的完整性,并显著促进冷冻保存中精子的生理特征和抗氧化酶能力,降低脂质过氧化反应的发生。