论文部分内容阅读
高剂量化疗(HDC)联合自体造血干细胞移植(AHSCT)是治疗恶性淋巴瘤、多发性骨髓瘤等血液系统恶性肿瘤的重要手段，其对乳腺癌等某些实体瘤的治疗研究尚在评价中。最新研究资料显示对于高危难治性乳腺癌，HDC联合AHSCT可显著提高患者的无病生存率及总生存率。自体造血干细胞移植物中污染肿瘤细胞回输常常是导致疾病复发的原因。因此移植物的体外净化是业内研究的方向之一。免疫磁性细胞分选(MACS)富集CD34~+细胞净化技术，是目前临床最广泛应用的造血干细胞移植物净化方法。但综合资料显示该方法仅可获得2～5个对数级的肿瘤细胞去除，并未显著延长患者的生存期。因此，寻求新的自体造血干细胞移植物净化方法自然成为提高疗效的研究方向。 基因治疗载体系统的研究发现造血干细胞与恶性肿瘤细胞表面腺病毒受体存在天然差异，这种差异为我们靶向净化造血干细胞移植物提供了新的选择。基因工程改造的选择性增殖腺病毒，可以特异性地杀伤肿瘤细胞，H101便是其中的代表。本课题组已完成的研究显示，乳腺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞表面腺病毒受体丰富，H101对其有较高转染率；而造血干细胞却基本不被腺病毒转染。这启发我们研究利用H101净化自体造血干细胞移植物的可行性，并将其与目前最常用的MACS技术进行比较，以寻求自体造血干细胞移植物体外净化的最佳方案。 净化效果评价体系的建立是比较上述两种净化方法的基础和关键。首先我们在体外通过MTT比色法、集落形成法，研究了不同感染复数的H101对乳腺癌细胞、多发性骨髓瘤细胞以及造血干细胞的细胞毒作用。结果发现在一定感染复数范围内，H101对肿瘤细胞的杀伤呈剂量效应关系，200MOI可以完全杀灭肿瘤细胞；而该剂量对造血干细胞增殖能力基本没有影响。继之，我们建立了一套检测自体造血干细胞移植物中的乳腺癌细胞及多发性骨髓瘤细胞的方法。将肿瘤细胞系列倍比稀释后与动员后健康供者的外周血单个核细胞(PBMC)混合。对乳腺癌细胞与PBMC的混合物，应用RT-PCR检测上皮细胞角蛋白CK-19mRNA表达，10~7个PBMC中混有10个乳腺癌细胞即可