【摘 要】
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产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）作为一种重要的人兽共患病病原,不仅能引起动物的多种疾病和造成家畜的大量死亡,而且也直接危害着人类的健康。目前,国内外关于奶牛养殖和挤奶过程中产气荚膜梭菌污染的风险因素分析的研究很少。本研究首先建立产气荚膜梭菌多重荧光定量PCR方法,然后对奶牛养殖和挤奶各环节样品进行快速检测分型,明确奶牛养殖和挤奶过程中各环节产气荚膜梭菌的污染状况并了解
【基金项目】
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“十三五”国家重点研发计划项目（编号:2018YFD0500500）；
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产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）作为一种重要的人兽共患病病原,不仅能引起动物的多种疾病和造成家畜的大量死亡,而且也直接危害着人类的健康。目前,国内外关于奶牛养殖和挤奶过程中产气荚膜梭菌污染的风险因素分析的研究很少。本研究首先建立产气荚膜梭菌多重荧光定量PCR方法,然后对奶牛养殖和挤奶各环节样品进行快速检测分型,明确奶牛养殖和挤奶过程中各环节产气荚膜梭菌的污染状况并了解其传播规律;同时,对各环节样品进行产气荚膜梭菌污染菌量的检测,并构建该菌在牛奶中的生长预测模型,利用@Risk和Excel软件,确定关键风险因素控制点。获得以下结果:1.建立的产气荚膜梭菌多重荧光定量PCR方法对cpa-PMD18-T、cpb-p GEM-T、etx-p GEM-T和ia-p GEM-T质粒拷贝数检测限均可达1×102拷贝/μL,菌液和DNA的检测限分别为102 CFU/m L和100 fg/μL,具有良好的敏感性、特异性和重复性。2.应用建立的多重荧光定量PCR检测方法,对从陕西省的2个规模化奶牛场采集奶牛养殖和挤奶环节的样品244份进行快速检测,同时进行分离纯化,共分离鉴定91株A型产气荚膜梭菌,二者的结果相符,表明A型菌为奶牛养殖和挤奶过程中的流行血清型。3.构建产气荚膜梭菌在牛奶中的Logistic生长预测模型,并对奶牛养殖和挤奶各环节样品的污染量进行检测,利用@Risk和Excel软件,确立初始奶带菌量和工人手及粪便为生鲜奶的关键风险因素控制点,空气、乳头和挤奶杯的污染也不可忽视。综上所述,本研究弄清楚了奶牛养殖和挤奶过程中产气荚膜梭菌的污染状况,确定了初始奶带菌量、工人手及粪便为生鲜牛奶产气荚膜梭菌污染的关键风险因素控制点,可为奶牛养殖企业有效防控牛奶产气荚膜梭菌污染提供科学依据。
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