金龟子绿僵菌对甾体C-α羟化反应工艺的研究

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本文研究了金龟子绿僵菌对甾体底物16α,17α-环氧黄体酮的C11-α羟化反应工艺,包括一步转化工艺、稀释工艺和菌丝结球的因素等内容。 考察了一步转化工艺的培养基组成、投料时间、溶料方式等因素,确定了摇瓶反应工艺:28℃培养36~38h的种子以10%的接种量接种二级,培养22-24h(pH降至3.6左右)投入20g/L浓度的底物(0.03%吐温分散),转化温度30℃,摇床上转化72h转化率可达70%.该工艺在10L机械搅拌发酵罐上溶氧效果不好,发酵液粘稠,转化率比摇床水平下降近20个百分点。 为了改善溶氧及发酵液性质,对稀释工艺进行了研究。系统地研究了稀释工艺中稀释比例、分散剂及消泡剂、pH、金属离子、投料方式等因素对转化的影响,确定了可行的稀释工艺路线:一级28℃培养36~38h的种子以10%的接种量接种二级培养基,培养20~22h左右将发酵液稀释一倍。投入总量1/4的底物预诱导,添加0.4g/LMnSO4促进转化,温度调整至30℃,3h后投入剩余的3/4底物。培养基配比同一步转化工艺,溶料时底物中添加相当发酵液体积0.5‰的吐温-80和0.5‰甘油聚醚。该工艺在10L、20L罐上溶氧得到改善,在底物浓度20g/L条件下转化45h转化率接近60%,可以进一步放大和推广。 确定了容易造成菌丝结球的一些因素,利于工艺的稳定。包括:氮源及生长因子不足、接种量小、菌种质量的变更、孢子不分散、温度低以及pH的调节等。
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