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【目的】1.进一步验证肿瘤转移抑制基因Kiss-1在结直肠癌细胞中调控生长、迁移和侵袭的功能与作用。2.研究Kiss-1是否通过抑制PI3K/AKT/NF-κB信号通路减少MMP-9的合成,从而抑制结直肠癌细胞的机动性、趋化性和侵袭性。【方法】1.以人结直肠癌细胞株HCT116为研究对象,采用慢病毒感染系统构建Kiss-1基因过表达和干扰表达的稳定细胞株,分别通过实时荧光定量PCR和免疫印迹的方法检测细胞株中Kiss-1在mRNA水平和蛋白水平的表达,鉴定Kiss-1在各细胞株中表达稳定性从而进行后续的研究。采用CCK-8的方法分析结直肠癌细胞增殖的能力;使用Annexin V-APC/7-AAD双色标记细胞,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;采用Transwells小室检测迁移和侵袭的实验方法鉴定细胞转移和侵袭的能力;通过免疫印迹的方法检测不同细胞株中MMP-9在蛋白表达水平。2.设置空白对照组,阴性对照组(空载体对照组),Kiss-1基因过表达细胞组,应用免疫印迹方法对各组细胞进行PI3K/AKT/NF-kB/MMP-9信号通路中PI3K、AKT、pAKT、P65、MMP9蛋白表达量进行检测3.用740Y-P(PI3K激动剂)处理Kiss-1基因过表达的细胞株,用免疫印迹方法对经过激动剂处理的细胞株进行PI3K、AKT、pAKT、P65、MMP9的表达水平的检测,同时检测细胞的增殖能力,凋亡水平以及迁移、侵袭能力。4.用PDGF(AKT激动剂)处理Kiss-1基因过表达的细胞株,用免疫印迹方法对经过激动剂处理的细胞株进行PI3K、AKT、pAKT、P65、MMP9的表达水平的检测。同时检测细胞的增殖能力,凋亡水平以及迁移、侵袭能力。【结果】1.通过慢病毒感染获得Kiss-1过表达和沉默的稳定细胞株,当Kiss-1基因在HCT116细胞中过表达时,在96小时内检测到其细胞生长速度与对照组相比明显滞后(P<0.01);但HCT116细胞中沉默Kiss-1基因的表达时,细胞生长速度与对照组相比无显著变化。与对照组相比,Kiss-1基因过表达组中MMP-9蛋白表达明显下调,细胞迁移和侵袭能力也显著减弱(P<0.01),但在HCT116细胞中沉默Kiss-1基因的表达时,MMP-9蛋白表达并未明显上调,也不能增强细胞迁移和侵袭的能力。与对照组相比,Kiss-1基因过表达组更易发生细胞凋亡(P<0.01);然而,在HCT116细胞中沉默Kiss-1基因的表达时并不能增强细胞的抗凋亡能力。2.与空白对照组和阴性对照组相比,过表达Kiss-1能够抑制PI3K、pAKT、p65、MMP-9的表达,但AKT的表达水平未发生明显变化。3.过表达Kiss-1的细胞株经过740Y-P(PI3K激动剂)处理后,PI3K、pAKT、p65、MMP-9的表达水平升高,AKT的表达水平未发生明显变化,并且与Kiss-1过表达株相比细胞的增殖能力增强(p<0.01)、抗凋亡能力增强(p<0.01)、迁移和侵袭能力增强(p<0.001)。4.过表达Kiss-1的细胞株经过PDGF(AKT激动剂)处理后,p AKT、p65、MMP-9的表达水平升高,PI3K、AKT的表达水平未发生明显变化,并且与Kiss-1过表达株相比细胞的增殖能力增强(p<0.01)、抗凋亡能力增强(p<0.01)、迁移和侵袭能力增强(p<0.001)。【结论】1.在结直肠癌HCT116细胞中,Kiss-1基因的过表达能抑制肿瘤细胞增生,促进肿瘤细胞凋亡。2.在结直肠癌HCT116细胞中,Kiss-1基因的过表达可能通过阻碍PI3K/AKT/NF-κB信号通路抑制MMP-9的表达,从而能够有效地抑制肿瘤细胞的浸润和转移。