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目的:本实验采用4-硝基喹啉-氧化物(4NQO)建立小鼠食管癌前病变模型,以抑膈方为观察对象,以全反式维甲酸(ATRA)为阳性对照,观察抑膈方对食管癌前病变相关指标的干预作用,探讨抑膈方的部分机制。方法:分组:①正常组(20只),常规饲养。②模型组(30只),予4NQO诱癌,14周末造模成功,遂撤去4NQO。③阳性对照组(20只),造模成功后撤去4NQO,予0.1ml(0.15mg)ATRA溶液灌胃。④预防组(30只),4NQO诱癌同时予抑膈方灌胃,每周3次,每次灌胃0.1ml(含免煎颗粒0.084g)抑膈方溶液。造模成功后撤去4NQO,继续灌胃。⑤治疗组(30只),造模成功后撤去4NQO,予抑膈方灌胃,剂量同预防组。每周记录各组小鼠体重1次,根据体重调整灌胃剂量。24周末模型组小鼠出现癌变,全部处死小鼠,取14、24周末小鼠行HE染色,取24周末小鼠食管组织行透射电镜、免疫组化、RT-PCR检测。结果:1观察活体小鼠的一般状况于2周后,模型组个别小鼠饮食量下降,活动度减弱,10周末毛发无光泽,颈部脱毛,有时会见发抖样,弓背卷缩;预防及治疗组小鼠饮食量、活动度、毛发光泽度较阳性对照组好,且无脱毛现象;预防组小鼠较治疗组精神状态、活动度稍好。实验过程中预防组死亡3只,模型组及阳性对照组、治疗组各死亡2只。2各组小鼠食管的大体观察将食管纵形剖开,14周末,正常组小鼠食管粘膜未见异常;模型组小鼠食管粘膜充血、或灰暗,局部隆起,可见灰白斑点、斑块。预防组小鼠食管粘膜色红,未见灰白隆起及斑点、斑块的形成。实验末,正常组小鼠未见肉眼病变,模型组小鼠食管粘膜出现乳头状瘤,并可见溃疡面形成。阳性对照组、预防组、治疗组小鼠出现乳头状瘤,可见白色斑块。3光镜下各组小鼠食管组织病理学观察正常组小鼠14、24周末食管上皮未见异常增生;模型组小鼠14周末异型细胞累及全层下2/3,24周末可见癌细胞,核大、深染,可见病理性核分裂;24周末阳性对照组异型细胞大部分介于上皮全层的1/3-2/3;预防组14周末异型细胞不超过上皮全层的1/3,24周末组异型细胞累及上皮全层的1/3-2/3;治疗组24周末异型细胞大部分超过上皮全层的2/3,少部分介于上皮全层的1/3-2/3。4透射电镜观察各组食管细胞的亚显微结构模型组较正常组细胞间隙增宽,桥粒减少,细胞质水肿,染色质变异。阳性对照组、预防组、治疗组较模型组细胞间隙稍紧密,桥粒较多;预防组、治疗组较阳性对照组细胞间隙宽、桥粒少;预防组较治疗组细胞间隙紧密、桥粒丰富。5免疫组化-SP法检测各组β-catenin、Wnt1、c-myc蛋白的表达β-catenin蛋白在正常组表达量少且主要为胞膜着色,在模型组中大量蓄积于胞浆及胞核,表现为胞质及胞核呈棕黄色。Wnt1蛋白在正常组表达水平低,在模型组中堆积于细胞质,表现为细胞质呈棕黄色。C-myc蛋白在正常组表达水平低,在模型组主要表达于细胞核,少量表达于细胞质,表现为细胞核及细胞质呈棕黄色。β-catenin及c-myc在模型组表达水平明显高于正常组(P<0.05);阳性对照组、治疗组、预防组明显低于模型组(P<0.05);预防组与阳性对照组无明显差别(P>0.05);治疗组高于阳性对照组(P<0.05);预防组明显低于治疗组(P<0.05)。Wnt1在模型组表达水平明显高于正常组(P<0.05);阳性对照组、治疗组、预防组明显低于模型组(P<0.05);预防组、治疗组高于阳性对照组(P<0.05);预防组与治疗组无明显差别(P>0.05)。6各组食管组织中β-catenin、Wnt1、c-myc基因的表达各组总体RNA各等量利用Olig(d T)15锚定引物来进行逆转录,用β-catenin、Wnt1、c-myc引物对逆转录产物进行PCR扩增,分别出现192bp、623bp、263bp特异性扩增带。其中模型组的扩增带最亮,正常组最暗。阳性对照组、预防组、治疗组与模型组相比,扩增带较暗。β-catenin、Wnt1、c-mycm RNA的表达水平用目的基因扩增片断的积分吸光度与GAPDH扩增片断的积分吸光度的比值表示。经统计学分析显示:β-cateninm RNA/GAPDHm RNA、c-mycm RNA/GAPDHm RNA在模型组比值明显高于正常组(P<0.05);阳性对照组、治疗组、预防组明显低于模型组(P<0.05);预防组与阳性对照组无明显差别(P>0.05);治疗组高于阳性对照组(P<0.05);预防组明显低于治疗组(P<0.05)。Wnt1m RNA/GAPDHm RNA在模型组比值明显高于正常组(P<0.05);阳性对照组、治疗组、预防组明显低于模型组(P<0.05);预防组、治疗组比值高于阳性对照组(P<0.05);预防组与治疗组无明显差别(P>0.05)。结论:1 4NQO为建立小鼠食管癌前病变动物模型的有效诱癌剂。2随着食管病理损害程度的加重,Wnt通路相关蛋白β-catenin、Wnt1、c-myc表达升高。3抑膈方能降低β-catenin、Wnt1和c-myc的表达,阻断食管癌的发生。预防用药具有明显优势。4抑膈方阻断食管癌发生的机制可能是降低了Wnt通路相关蛋白β-catenin、Wnt1和c-myc的表达。