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[目的]研究靶向胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)的小干扰RNA(siRNA)对胶质瘤生长的抑制作用;构建靶向血管内皮生长因子(VEGF)、神经生长因子(NGF)双基因的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体并鉴定,用于胶质瘤基因治疗。[方法]第一、二部分:体外化学合成靶向IGF-1R和IGF-1基因的siRNA,脂质体法将siRNA以不同浓度梯度转染胶质瘤C6细胞,同时使用绿色荧光素标记的小干扰RNA FITC-siRNA转染细胞,荧光显微镜下观察siRNA转染效率;RT-PCR和Western blot测定RNA干扰后IGF-1R和IGF-1的表达水平;采用Transwell体外侵袭试验进行细胞体外的侵袭力分析;流式细胞仪检测细胞凋亡率和周期;裸鼠成瘤实验测定IGF-1R和IGF-1基因表达下调后胶质瘤C6细胞在裸鼠体内致瘤能力的改变。第三部分:分别设计并体外合成靶向基因VEGF、NGF的特异性编码shRNA序列的寡核苷酸,克隆到经BglⅡ-HindⅢ酶切线性化的pSUPER质粒H1启动子下游,构建shRNA重组质粒,进而脂质体介导瞬时转染胶质瘤细胞系U251,半定量RT-PCR检测VEGFmRNA、NGFmRNA表达。[结果]第一部分:荧光显微镜下荧光素标记的siRNA转染组可见到细胞质内清晰的绿色荧光,脂质体OligofectamineTM2000的转染效率接近100%;靶向IGF-1R基因的siRNA可以有效抑制IGF-1R基因的表达,各特异性siRNA不同浓度转染组IGF-1R mRNA表达水平可下调约10%-80 %,蛋白表达减少50%;流式细胞术检测细胞凋亡率转染组为22.47%±3.15% ,与阴性对照组2.3%±0.9%和空白对照组1.14%±0.79%比较有明显提高,而阴性、空白对照组相比无明显差异;肿瘤细胞的侵袭力明显下降,在裸鼠体内成瘤的能力大大降低。第二部分:靶向IGF-1基因的siRNA可以有效抑制IGF-1基因的表达。荧光显微镜下荧光素标记的siRNA转染组可见到细胞内清晰的绿色荧光,脂质体Oligofecta-