香樟树种子核糖体失活蛋白稳定性的研究

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核糖体失活蛋白(ribosome-inactivating protein,RIP)是一种具有RNAN-糖苷酶活性的蛋白质,广泛存在于高等植物的根,叶和种子细胞中,在抗肿瘤、抗HIV和抗动植物病毒方面有优秀的表现。香樟树(Cinnamomum camphora)的种子含有大量的核糖体失活蛋白,并且香樟树在我国的分布也很广泛,可是目前对其种子的利用并不是很充分,这既是是对资源材料的浪费,又是对环境的污染。本文以香樟树的种子作为研究对象,用丙酮和硫酸铵对蛋白质沉淀、配位亲和层析的方法对香樟的种子核糖体失活蛋白进行分离纯化。通过与肝癌细胞作用后,对其性质进行研究,用MgCl2和蛋白酶抑制剂对其处理,再用SDS-PAGE电泳对其性质进行分析,以期了解核糖体失活蛋白的性质和香樟种子中两种RIP之间的相互转化关系与条件,主要的研究结果如下:(一)确定了一种较为快速便捷的香樟的种子核糖体失活蛋白的提取工艺,通过电泳鉴定和与癌细胞的作用能肯定本实验所提取的蛋白质为核糖体失活蛋白。(二)在提取过程中的除去油脂和其它杂质方面,用丙酮对蛋白质进行沉淀浓缩要比用硫酸铵进行沉淀浓缩效果要好,而且用时要少,但是弊端是蛋白质失活较明显。所以,在提纯核糖体失活蛋白方面可以用硫酸铵进行沉淀浓缩;而用不同条件进行处理时可以用丙酮进行沉淀浓缩。(三)与自然条件下香樟果实核糖体失活蛋白的降解趋势相比,MaCl2和EDTA-PMSF处理后的降解趋势要明显的不同。其中MgCl2处理过的粗提液表现的是辛纳毒蛋白降解为新丰毒蛋白的量要大于未用任何试剂处理过的粗提液;而用EDTA-PMSF这两种抑制剂处理时,由于蛋白质得到了保护,所以转化生成的新丰毒蛋白要比未加入试剂处理的粗提液要少的多。(四)辛纳毒蛋白(Cinnamomin)与新丰毒蛋白(Camphorin)之间的转化关系是与时间温度等外部条件成正比的,这与果实细胞的衰老进程有一定的一致性,从而能用这二者之间的转化关系来说明果实细胞的衰老进程。
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