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研究背景:1955年首先由Waksman和Adams提出实验性自身免疫性神经炎(EAN)这一概念,它与吉兰-巴雷综合征(Guillain-Barre syndrome,GBS)在临床、形态学、电生理、病理、免疫学特征等多方面表现一致, 因此,作为GBS的动物模型被国际认可并被广泛用于GBS的发病机制和免疫治疗等方面的研究。周围神经炎性细胞浸润和脱髓鞘是诊断 EAN 和 GBS 的金标准,既往研究表明,P2 53-78 多肽在敏感大鼠体内可成功诱导出 EAN。而调节性T细胞(CD4+CD25+regulatory T cells,Tregs)是一类在体内、外环境中均具有免疫调节功能的细胞,通过抑制效应性 T 细胞的活化与增殖来调控机体对自身和外来抗原的免疫应答水平而维持自身免疫耐受状态,与自身免疫性疾病的发生密切相关。目前国内外对于 Tregs 细胞与 GBS 关系的研究不多,且对 Tregs 细胞在GBS 中的免疫作用机制及回输后的治疗效果都还知之甚少。本研究旨在探索过继回输同源Tregs细胞后对EAN模型大鼠是否有治疗作用,为GBS的免疫治疗提供新的实验依据与理论基础。 目的:研究过继输注体外扩增的同源CD4+CD25+Tregs细胞对实验性变态反应性神经炎(EAN)大鼠的治疗作用。 方法:1.10%水合氯醛深度麻醉大鼠,利用致敏剂成功诱导EAN,并将其随机分为以下四组(n=8):健康正常组、未干预组、低剂量治疗组和高剂量治疗组; 2.首先采用免疫磁珠技术阴性分选正常大鼠脾脏中的CD4+T细胞,然后利用流式细胞术从CD4+T细胞中分选出Tregs,并进行体外培养和扩增; 3.测定扩增后的Tregs的活性、纯度及体外抑制功能; 4.回输Tregs治疗EAN大鼠模型; 5.比较细胞回输前后各组坐骨神经病理、电镜形态学改变及Tregs水平变化,分析评估Tregs在EAN中的治疗效果。 结果:1、EAN 模型制作成功,模型组大鼠的坐骨神经可见大量炎细胞浸润, 弗莱明染色及电镜可见原发性髓鞘破坏,甚至轴索等结构的损害。 2、经过免疫磁珠技术结合流式细胞技术分离的CD4+CD25+Tregs细胞纯度大于95%,平均98.23±0.42,活性大于95%。 3、经过15天的4轮扩增后CD4+CD25+Tregs细胞有40-100倍不等的增值,并且在扩增过程中仍能保持稳定的表型,经过体外扩增后的细胞纯度大于85%,平均86.47±0.78,t=23.327,p=0.002<0.05,与分选后的细胞相比差异有统计学意义。 4、扩增后的CD4+CD25+Tregs细胞保持了免疫抑制功能。 5、治疗组大鼠较未干预组大鼠坐骨神经炎细胞浸润及髓鞘、轴索损害情况明显减轻,其外周血CD4+CD25+Tregs细胞含量较未干预组明显升高(P<0.05),且随着过继回输剂量的增加疗效越显著。 结论: CD4+CD25+Tregs 细胞过继回输给 EAN 模型大鼠具有显著的治疗效果,这些研究成果将为GBS的临床治疗提供一定的实验理论基础。