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目的:转录因子是广泛存在于机体各种组织细胞中,能够结合在某种基因上游特异核苷酸序列上的蛋白质,这些蛋白质通常能调控特定基因的转录。一些小分子化合物能影响转录因子的二聚体形成或影响转录因子与DNA分子的结合,因此它们可以改变转录因子介导的基因调控。转录因子作为抗癌药物靶点的研究尚局限于活性筛选的早期阶段,原因主要是难于获得转录因子在正常状态和致癌状态中信号通路的平衡,很难特异性抑制转录因子的某个信号通路及环节,难于判断转录因子抑制剂用后的药效,同时转录因子的双重作用,以何种剂型、何种给药途径及与何种抗肿瘤药物联用较难设计。组蛋白（histones）,真核生物体细胞染色质中的碱性蛋白质,与带负电荷的双螺旋DNA结合成DNA-组蛋白复合物,有六种类型:H1、H2A、H2B、H3、H4,而转录因子与DNA相结合,在此可以看做与组蛋白相结合。因此我们使用CRISPR/Cas9技术在组蛋白中构建AVItag的稳定敲入细胞系,使用生物素亲和素系统,将不同的转录因子（TF）与生物素泛素化连接酶（Bir A）融合,从而在上述细胞系中可检测转录因子是否作用,后使用化合物库进项筛选,检测某种化合物是否存在阻止转绿因子功能的作用,从而达到筛选抑制转录因子药物的结果。方法:（1）构建组蛋白H3F3A和组蛋白H3F2真核过表达载体,每个组蛋白分别在其基因序列的N端插入Avitag基因序列构形成融合基因建两个载体,与此同时另外两个载体在C端插入Avitag基因序列,这样构建四个过表达载体（2）使用293T细胞系分别瞬时转染上述四个真核过表达载体,同时与真核表达Bir A载体转染共转染,6h后加入生物素,30h提蛋白使用western blot技术检测组蛋白表表达,以及HRP-labeled Streptavidin为抗体检测Avitag的表达情况（3）构建CRISPR/Cas9系统在组蛋白H3F3A及H3F2敲入相关的sg RNA表达载体及作为敲入的修复模板载体,修复膜版中包涵需要插入的Avitag基因序列以及抗性基因嘌呤霉素基因序列（4）应用CRISPR/Cas9技术在293T细胞系中构建组蛋白H3F3A和H3F2稳定敲入AVItag的相应细胞系（5）使用PCR在基因组水平检测是否插入成功,与此同时在构建好的细胞系中瞬时转染真核表达Bir A基因载体,6h后加入生物素,30h提蛋白使用western blot技术检测,HRP-labeled Streptavidin为抗体检测组蛋白结果:（1）融合了Avitag基因序列的组蛋白H3F3A和组蛋白H3F2真核过表达载体,无论是N端或是C端插入Avitag使用western blot都能检测到相应条带（2）应用CRISPR/Cas9技术在293T细胞系中构建组蛋白H3F3A和H3F2稳定敲入AVItag的相应细胞系,在基因组水平进行PCR扩增,得到相应敲入条带,说明敲入成功,AVItag基因以稳定在细胞系中表达（3）在构建好的细胞系中瞬时转染真核表达c-myc-Bir A基因载体,6h后加入生物素,30h提蛋白使用western blot技术检测,HRP-labeled Streptavidin为抗体检测到组蛋白条带说明系统构建成功结论:本文通过CRISPR/Cas9技术成功的在293T细胞系中插入标签Avitag,与此同时,在细胞系中引入了一个可检测的反应,即,利用该细胞系中的生物素化反应,我们可以定性的检测外来化合物对某特定转录因子的抑制作用,即转录因子与生物素泛素化连接酶（Bir A）的融合蛋白,在细胞中表达,同时加入抑制剂,如果有抑制作用则无法触发生物素与亲和素系统,从而达到筛选药物的作用。