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目的建立模拟日光紫外线B辐射诱导的HaCaT细胞恶性转化的病理模型,从Gadd45a、DNMTs、P16和RASSF1A基因甲基化的角度,研究扇贝多肽(PCF)抑制UVB诱导的HaCaT细胞恶性转化的分子机制,为扇贝多肽防治UVB辐射致皮肤癌提供理论依据。方法采用CCK8法筛选并确定UVB辐射诱导的HaCaT细胞恶性转化的单次辐射剂量,Gimsa染色观察细胞形态初步确立UVB辐射诱导HaCaT细胞恶性转化的终点,软琼脂克隆形成实验、明胶酶谱法检测MMP-9蛋白酶的分泌证明UVB辐射诱导HaCaT细胞恶性转化模型的成功。实验设计分为4组：正常对照组、UVB模型组、UVB+2.84mmol/LPCF, UVB+2.84mmol/L维生素C阳性对照组。经平板集落形成实验,软琼脂集落形成实验,流式细胞术检测细胞周期确立PCF对UVB诱导的HaCaT细胞恶性转化的抑制作用；RT-PCR检测甲基转移酶DNMTs(DNMT1、DNMT3a, DNMT3b)mRNA经时(UVB辐射4、8、16、20次)表达；蛋白印迹法检测GADD45a, DNMT3b, P16及RASSFIA蛋白经时(UVB辐射4、8、12、16、20次)表达。以高分辨率溶解曲线(MS-HRM)检测PCF对处于UVB诱导的HaCaT细胞恶性转化各阶段(4次、12次、20次)中P16、RASSF1A基因甲基化的程度。结果UVB(波长峰值297nm)照射的辐照强度约在1luw/cm2,单次辐射剂量10mJ/cm2,辐射次数20次,总辐射剂量200mJ/cm2时,成功建立UVB辐射诱导的HaCaT细胞恶性转化模型；2,84mmol/LPCF比VC更明显抑制UVB辐射诱导的HaCaT细胞恶性转化(P<0.05)。DNMT1和DNMT3amRNA的经时表达显示UVB辐射HaCaT细胞DNMT1和DNMT3a的表达量与辐射前相比差异无统计学意义(I>0.05); DNMT3b的mRNA和蛋白的表达呈现逐渐升高的趋势,UVB辐射20次后其表达量达到高峰(P<0.05); Gadd45a蛋白经时变化显示UVB辐射4次时即可检测表达量达到高峰,随后表达量逐渐下降,UVB辐射20次后蛋白表达到低谷(P<0.05)；P16和RASSF1A蛋白经时变化显示UVB辐射后表达量逐渐下降,UVB辐射20次后蛋白表达到低谷(P<0.05)；PCF和VC均可抑制P16和RASSFIA基因的甲基化(P<0.05),促进P16, RASSFIA和GADD45a蛋白的表达(P<0.05),抑制DNMT3b蛋白的表达(P<0.05)且与VC相比,PCF效果更显著(P<0.05)。结论国际上首次建立模拟日光紫外线B辐射诱导的HaCaT细胞恶性转化模型,揭示P16和RASSFIA基因的高甲基化与HaCaT细胞恶性转化密切相关。证明扇贝多肽通过调节DNMT3b和GADD45a基因表达而抑制P16和RASSF1A基因的高甲基化,阻上UVB辐射诱导的HaCaT细胞恶性转化。