目的:儿童肝移植是患有终末期肝病的儿童的有效治疗手段,患儿术后需要常规服用免疫抑制剂他克莫司。然而,目前临床应用中,免疫抑制剂存在个体差异大、治疗窗狭窄等问题。研究发现个体的药物代谢差异主要由于药物代谢基因的表达差异造成。这一差异容易导致部分儿童用药过度而造成不良的临床后果。而目前影响药物代谢的相关mi RNA研究不断深入,本研究期望通过对他克莫司代谢差异个体的供肝组织的差异mi RNA进行分析,并通过一系列实验验证,讨论mi RNA在影响他克莫司代谢方面可能发挥的作用,为儿童肝移植术后免疫抑制剂个体化指导提供依据。方法:通过收集临床上术后长期随访的典型他克莫司药物快代谢和慢代谢的儿童肝移植受体的供肝标本,利用高通量测序,检测肝脏组织中m RNA与mi RNA、lnc RNA的表达情况,并进一步利用生物信息学工具筛选出具有差异性表达的mi RNA,并利用mi RNA靶基因预测网站结合差异表达基因情况,获得药物代谢相关的候选mi RNA。我们进一步通过在肝细胞系、肝原代细胞中进行验证,将肝细胞过表达或进行敲减mi RNA,观察其对药物代谢过程的影响,并结合细胞实验具体研究mi RNA靶向药物代谢基因对他克莫司代谢的调节机制。结果:在对测序数据进行分析之后,我们得到具有表达差异的m RNA的共808条,其中包括644个上调,264个下调;同时,得到具有表达差异m RNA的共36条,其中包括有17个上调,19个下调。差异mi RNA中包括hsa-mi R-10b-3p以及hsa-mi R-4683等,通过过表达和敲减mi RNA,观察细胞对他克莫司代谢水平发现,hsa-mi R-10b-3p的变化能够对Hepa RG细胞药物代谢水平产生影响。通过数据库挖掘其靶向的药物基因,发现其靶向CYP2C19的3’UTR区域。进一步用实验证实hsa-mi R-10b-3p能够抑制CYP2C19基因的转录后表达水平,同时双荧光素酶报告基因实验证实两者在细胞内存在同源结合位点的直接相互作用。结论:miRNA可能在他克莫司药物代谢中发挥重要的作用,它通过其经典作用机制抑制药物代谢过程中参与的代谢酶表达水平。实验发现hsa-mi R-10b-3p有可能通过抑制细胞色素酶CYP2C19的转录后表达进而影响药物的代谢。mi RNA直接或间接调节参与药物代谢,药物转运,药物靶标和下游信号分子的基因的表达。而mi RNA多态性,影响mi RNA表达和/或mi RNA-m RNA相互作用的遗传变异,能够对药物反应中个体间差异提出新的思路。