基于荧光的高通量筛选转氨酶及Al3+选择性的荧光检测研究

来源 :海南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:yinhongtao2009
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生物催化在制药工业中得到了愈来愈广泛的应用。相较于传统的化学方法的缺陷,如苛刻的反应条件,需要有毒的过渡金属催化剂,挥发性有机物主要是溶剂和立体选择性不足等,酶催化除了具有优异的对映选择性之外,酶在水性介质中以及在环境温度和pH下操作的能力意味着它们被认为是金属催化反应的潜在“绿色替代物”。随着转氨酶在工业界的不断推广应用,越来越多的尝试去发掘和筛选更有效率更加经济的转氨酶。然而,转氨酶催化也有一些缺陷,如传统筛选筛选转氨酶的方法普遍存在耗费时间长、检测费用昂贵等缺点;还有转氨酶在催化过程中的反应平衡问题。基于以上情况,本文构建了一种高效快速筛选转氨酶的方法:首先选用1-萘甲胺作为转氨酶反应中的氨基供体,丙酮酸作为氨基受体,经转氨酶反应后,1-萘甲胺失去氨基变成了1-萘甲醛,1-萘甲醛接着与体系中加入的草酰二肼反应生成一种酰腙类化合物,该化合物在波长486 nm处有较强的荧光发射,所以通过荧光检测体系在486 nm处荧光的强弱来定性分析转氨酶的活性;同时,本文构建了另一组酶促反应平衡消除体系,以苄胺为氨基供体,经转氨酶反应后生成的副产物苯甲醛可以与草酰二肼反应,从而打破了酶促反应的平衡促使转氨酶反应得到更多所需要的胺。另外,我们发现高通量筛选中合成的酰腙类化合物易于金属离子发生配位络合反应,使自身的光学性质发生显著变化,可以通过其荧光强度的改变来定量检测金属离子的含量。除此之外,作为地壳中最丰富的金属元素之一,铝在现代社会广泛使用;另一方面,铝离子的潜在毒性也引起了相当大的注意。据报道,人体中高水平的铝离子会对神经系统造成严重损害,从而诱发各种疾病。因此,如何快速、高效检测低浓度铝离子的含量成为人们日益关注的问题。为检测Al3+的含量,本文中设计合成了一种简单的荧光探针L(2-羟基-1-萘甲醛草酰二腙)作为配体。该探针可以通过荧光“开关”响应来识别A13+;相比对其他金属离子,探针L对Al3+具有优异的选择性,排除了其他金属离子对L荧光强度的干扰。同时,该方案找出了L的荧光强度与金属离子浓度的线性关系,从而达到准确检测液相中Al3+含量的效果。
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