随着人民物质生活水平的不断提高,对食品质量要求也愈来愈高,食品安全现如今已经成为影响人类生命健康财产安全的重大公共卫生问题。食源性致病菌是引起食品安全中毒事件最主要的原因,而副溶血弧菌主要污染海产品从而引起急性肠胃炎。因此,快速有效地检测筛查污染的海产品,是有效防控副溶血弧菌食源性疾病暴发的必要条件。首先,本研究以副溶血弧菌特异性tlh基因设计合成引物,并联合BCAC,建立了一种非预增菌快速检测鱼肉污染副溶血弧菌方法。BCAC能成功吸附溶液中的水溶性DNA抑制剂且不吸附细菌,模拟副溶血弧菌污染1 g鱼肉样品,经4 g BCAC吸附处理后用于实时荧光环介导等温扩增反应。结果显示,本研究建立的Rti-LAMP方法对纯培养副溶血弧菌的检测灵敏度为1 CFU/反应。模拟副溶血弧菌污染鱼肉经预增菌4 h,提取细菌DNA用于Rti-LAMP扩增,其最高检测灵敏度为10 CFU/g,整个检测需要约7 h。而采用BCAC前处理联合Rti-LAMP方法建立的非预增菌快速检测鱼肉污染副溶血弧菌的最低检出限为3 CFU/g,用时约4.5 h。说明BCAC-Rti-LAMP是一种快速灵敏检测鱼肉污染副溶血弧菌的方法。但是,BCAC-Rti-LAMP方法不能有效区分死、活细菌。基于此,本研究蒙脱石封闭的活性炭联合叠氮溴化乙锭前处理样品,再采用Rti-LAMP非预增菌快速检测鱼肉中污染活的副溶血弧菌。模拟副溶血弧菌污染1 g鱼肉样品,经4 g BCAC吸附处理,精制细菌样品,然后加入终浓度6.0μg/m L EMA暗处理5 min,置于500 W的光照下反应10 min后,提取细菌DNA模板用于Rti-LAMP扩增反应,结果显示,该方法最低能检出6 CFU/g活的副溶血弧菌污染。从市场购买海水鱼样品33份用于检测副溶血弧菌污染情况。结果表明,国标法能检测到两份副溶血弧菌阳性样品,BCAC-Rti-LAMP方法能检测到6份阳性样品,BCAC-EMA-Rti-LAMP方法能检测到3份阳性样品,显示BCAC-EMA-Rti-LAMP较BCAC-Rti-LAMP和国标法检测符合率更高,而前者较国标法更快速灵敏,有望为检测鱼肉活的副溶血弧菌污染提供一种快速检测筛查方法。鉴于鱼肉等食品成分的复杂性,免疫磁珠法富集食品中含量较低的副溶血弧菌也是一种有效的前处理技术。为此,本研究首先通过U型管分离产鞭毛能力强的副溶血弧菌,然后分离鞭毛,分离纯化后将鞭毛抗原和全菌体抗原各取250μg分别与等量佐剂混匀,在雌性日本大耳兔的皮下多次免疫,制备抗血清。纯化抗体经间接ELISA测定多克隆抗体的效价为1:320000,为建立副溶血弧菌的免疫吸附前处理样品联合Rti-LAMP检测方法奠定了基础。