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甲状旁腺激素相关肽(PTH-related peptide,PTHrp)首先是在伴有恶性高钙血症的恶性肿瘤患者的血液中发现的,它与甲状旁腺激素(PTH)在生理功能上有很大的相似性,二者在N端的前13个氨基酸中有10个是完全一样的。PTHrp在机体的各种组织器官内广泛表达,但表达量却很低。PTHrp是一种多功能激素,在包括心血管、泌尿、神经系统在内的几乎所有生理系统都能发挥其特定的功能。 我们从人血细胞中提取基因组DNA,并以之为模板,PCR扩增PTHrp1-141编码序列,并将此序列克隆入非融合型表达载体pBV220及融合型表达载体pET-42a中。经表达条件优化后,重组表达载体pBV220/PTHrp1-141在E.coli DH5α的表达量仍然很低。重组表达载体pET-42a/PTHrp1-141和pET-42a/PTHrp1-86在E.coli BL21(DE3)的表达产物主要存在于包涵体中,占菌体蛋白总量的30%以上。经Western Blotting鉴定,融合表达产物GST-PTHrp1-141和GST-PTHrp1-86具有PTHrp免疫活性。包涵体复性后,首先经Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化,然后利用因子Xa切去担体蛋白GST,最后通过超滤进一步纯化和浓缩产物。重组PTHrp1-141与PTHrp1-86的分子量分别约为18KD和13KD。通过检测MG63细胞内cAMP浓度,我们可知重组PTHrp1-141与PTHrp1-86具有生物活性,而且,后者活性略高于前者,但都明显低于hPTH1-34。