邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(Ethylhexyl pHthalate,DEHP)属于邻苯二甲酸酯类化合物(phthalaticacidesters,PAEs),是一种增加塑料柔软性的添加剂。该类物质可通过生产、包装等途径污染食物,对人类产生毒害,主要影响内分泌失调和生物体生殖机能,被归类为环境荷尔蒙。检测DEHP残留可采用仪器法,如高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GS)、气相色谱-质谱联用技术(GC-MS),这些方法准确、灵敏、有效,但均需要昂贵的仪器、专业的操作技能和复杂的样品处理程序。近一、二十年来,ELISA法被快速发展用于残留检测,具有简单、准确、高效、廉价、特异性强,适于大批量样品的快速筛选的优点。本研究以单克隆抗体和酶联免疫吸附测定技术(ELISA)为基础,通过蛋白质连接技术合成DEHP人工抗原,制备灵敏度高、特异性强、效价高的抗体,并建立DEHP的CiELISA检测方法。1.DEHP人工抗原的合成与鉴定。先通过在DEHP中加上硝基之后,再通过重氮化法与蛋白质链接偶联,制备人工抗原DEHP-BSA、DEHP-HSA,经紫外扫描和免疫学方法初步鉴定偶联成功。以DEHP-BSA作为免疫原,DEHP-HSA作为包被原。2.DEHP的单抗制备。用DEHP-BSA常规免疫BALB/c小鼠,五免后血清效价达1：12000以上。通过杂交瘤技术和酶联免疫技术最后筛选获得1株能稳定分泌抗DEHP特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞,命名为4C2,其分泌的抗体对DEHP的表现出较强的结合能力,采用体内诱生法,把4C2杂交瘤细胞注入小鼠腹腔,制备DEHP的腹水,制备的腹水效价为1:50000,蛋白浓度为15.9mg/mL。3.ELISA检测方法的建立。利用4C2杂交瘤细胞制备的抗DEHP腹水建立检钡(?)DEHP的CiELISA方法。建立标准竞争曲线,DEHP浓度在2～50ng/mL时,标准曲线线性方程为y=-0.3308x+0.6313(R2=0.9935),IC50为8.16ng/mL,LOD低于0.5ng/mL, LOQ为2.12ng/mL。该单抗对DEHP的抑制率为100%,对邻苯二甲酸二丁酯、邻苯二甲酸二异丁酯交叉反应率分别为35.4%、39.5%,与其他交叉反应率小于0.1%。4.添加回收实验。将建立的CiELISA方法应用于瓶盖内衬垫的添加回收试验。当对样品液做2倍稀释时,样品基质干扰基本消失。在0～20ng/mL范围内,曲线方程为：y=-0.4698x+0.7246,R2=0.9959,IC50为3.76ng/g,LOD低于1.563ng/g。当添加DEHP浓度在5-25ng/mL之间时,回收率在76.67%～95.23%之间,批间差异和批内差异均小于10%。