胃肠道间质瘤循环肿瘤细胞检测方法建立及其临床意义

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目的循环肿瘤细胞在多种肿瘤中具有预后及预测作用,而有关循环肿瘤细胞对胃肠道间质瘤的预后及预测作用的研究极少。本研究旨在阐明外周血中循环肿瘤细胞对胃肠道间质瘤患者的预后作用,研究其预测肿瘤复发与转移及其监测甲磺酸伊马替尼治疗效果的意义。方法以胃肠道间质瘤的特异性标志物DOG1作为目的基因,通过实时定量PCR法检测其在胃肠道间质瘤患者及非间质瘤者外周静脉血中的表达量,了胃肠道间质瘤患者复发转移的风险。1、本研究共纳入121例胃肠道间质瘤患者及54例非间质瘤者。根据qRT-PCR结果,非间质瘤者外周血单核细胞中DOG1最高表达量为3×10-5,并以此判定循环肿瘤细胞是否存在的依据。采集胃肠道间质瘤患者外周静脉血,2小时内提取外周血中单核细胞;2、从单核细胞中提取出RNA,并将其反转录成cDNA;3、使用实时定量PCR(qRT-PCR)法检测外周血单核细胞中DOG1的表达量;4、使用χ2检验比较DOG1表达与临床病理参数之间的关系,Kaplan-Meier法及log-rank法比较DOG1不同表达组无病生存期,多因素分析使用Cox回归。结果121例胃肠间质瘤患者中,65例被定义为DOG1阳性(54%)。DOG1阳性与肿瘤大小(p<0.000)、核分裂象(p=0.011)危险分级(p=0.026)密切相关,而与性别、肿瘤位置、细胞形态及Ki-67无关(p=0.248、0.611、0.508、0.144)。DOG1阳性患者无病生存期明显短于阴性患者(15.3 versus 19.6months,p=0.038)。DOG1表达量在患者接受手术治疗后呈下降趋势,大部分患者DOG1表达变为阴性,DOG1仍为阳性的患者出现了肝脏转移。需甲磺酸伊马替尼治疗的胃肠道间质瘤患者DOG1表达量在治疗后呈下降趋势,而出现疾病进展的病人DOG1表达量增高。结论DOG1的表达增高可能与胃肠道间质瘤的复发或转移有关,监测DOG1的表达量可能帮助术前需接受伊马替尼的患者选择最佳手术时机。实时定量PCR监测胃肠道间质瘤患者外周血循环肿瘤细胞有望作为一个动态监测指标,对胃肠道间质瘤的复发、转移、预后及伊马替尼治疗效果提供有价值的信息。
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