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目的：反义寡核苷酸技术（antisense oligonucleotides technique）在1978年首次应用于抑制鸡肉瘤病毒的复制，此后逐渐成为公认的具有高度特异性和低毒性作用的基因干预手段。反义寡核苷酸能通过碱基配对原则与细胞内核酸特异结合形成杂交分子，从而在转录或翻译水平抑制特定基因表达。随着分子生物学和遗传工程的发展，现在已经能够快速、简易地合成较短的核苷酸片断，即寡核苷酸。此项技术不仅能应用于生命科学的研究，它在医学上的应用也越来越广泛，如治疗恶性肿瘤、病毒性疾病、炎症性疾病及减少疤痕的形成。尽管反义寡核苷酸技术在国外已进入临床实验治疗阶段，国内也已开始研究，但反义寡核苷酸要作为一类新型药物普遍应用于治疗有待于更深入的研究，尤其对其靶标基因作用机制的研究。选择对肿瘤有治疗作用的特定目的基因靶标是反义寡核苷酸治疗的关键所在。癌变细胞的共同特征是与细胞增殖、分裂或分化有关的基因出现异常，因此应用反义寡核苷酸技术抑制异常表达的基因，能逆转或去除肿瘤细胞恶性增殖和扩散的行为。S期激酶相关蛋白2（S-phase kinase-associated protain 2，Skp2）是在恶变细胞中发现的细胞周期相关蛋白，它经泛素—蛋白酶体途径（ubiquitin-proteasome pathway，UPP）降解一些细胞周期调节因子，从而在细胞增殖调控中起重要作用。同时，Skp2有癌基因的潜能，在多种人类恶性肿瘤中高表达，并与肿瘤恶性程度及预后不良有密切联系。胃癌是世界上最常见的消化道恶性肿瘤之一，其死亡率一直居恶性肿瘤之首，而我国胃癌患病及死亡率超过世界平均水平的两倍。胃癌和其它恶性肿瘤一样都是多因素、多阶段的获得性基因疾病，包括原癌基因的激活和抑癌基因的失活，并伴随着细胞增殖的异常。Skp2作为细胞增殖调控基因和潜在癌基因，它同样在胃癌中高表达并与胃癌的恶性程度相关。因此，Skp2基因在胃癌的发生、发展中有着重要的地位，有望成为胃癌治疗的靶点。近年来，针对胃癌风险基因的反义寡核苷酸治疗手段逐渐成为一种具有潜在价值的胃癌治疗手段。然而，针对Skp2基因的恶性肿瘤治疗研究刚刚起步，而采用Skp2反义寡核苷酸治疗胃癌的研究还未见报道。鉴于上述原因，本研究通过合成互补于Skp2 mRNA核苷酸序列的反义寡核苷酸（antisense oligodeoxy-nucleotides，ASODN），研究Skp2基因在胃癌细胞SGC-7901生长和增殖中的作用及其可能机制，从而为针对Skp2基因的肿瘤治疗提供初步的理论依据。方法：根据实验设计，以细胞的不同处理因素分组：正常对照组，Skp2无义寡核苷酸（nonsense oligodeoxy-nucleotides，NSODN）处理组，以及Skp2反义寡核苷酸（antisense oligodeoxy-nucleotides，ASODN）处理组，转染浓度分为50 nmol／L，200 nmol／L和400 nmol／L。实验方法如下：采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000 Reagent包裹Skp2寡核苷酸转染SGC-7901细胞；通过显微镜和MTT实验观察细胞的生长和增殖情况；应用流式细胞术检测细胞周期；提取细胞总RNA，应用逆转录聚合酶链反应检测细胞Skp2、p27 mRNA表达变化；提取细胞总蛋白，应用Western-blot法检测细胞Skp2蛋白、p27蛋白及p53蛋白表达变化。结果：1．转染200 nmol／L Skp2 ASODN后的SGC-7901细胞生长速度明显减慢，细胞边界不清，连接松散，失去克隆性生长特性。2．200 nmol／L的ASODN在24 h、48 h、72 h等各个时间段上对胃癌细胞的增殖均有明显的抑制作用，p＜0.01。但在高浓度（400 nmol／L）、长时间（48 h以上）作用下的NSODN和ASODN对胃癌细胞均有较大的非反义性抑制效应，两者无显著性差异，p＞0.05。3．200 nmol／L NSODN组细胞周期与正常对照组相比无明显变化，而200 nmol／LASODN组细胞周期发生改变：G0／G1期细胞所占比例略有降低趋势，而S期细胞所占比例却明显高于正常对照组细胞，p＜0.05。4．200 nmol／L NSODN组Skp2 mRNA表达量与正常对照组相比无显著性差异，p＞0.05；200 nmol／L ASODN组Skp2 mRNA表达量明显低于正常对照组，p＜0.05；200 nmol／L的NSODN组和ASODN组p27表达量与正常对照组相比均无显著性差异，p＞0.05。5．200 nmol／LASODN和NSODN转染细胞后：ASODN组Skp2蛋白表达量明显低于正常对照组，p＜0.05；ASODN组p27及p53蛋白表达量明显高于正常对照组，p＜0.05；NSODN组Skp2、p27及p53蛋白表达量与正常对照组相比均无显著性差异，p＞0.05。结论：1．Skp2反义寡核苷酸能使胃癌细胞Skp2 mRNA水平和蛋白表达水平均下降，表明在体外实验情况下，应用反义寡核苷酸技术能有效抑制目的基因的表达。2．Skp2反义寡核苷酸能改变胃癌细胞生长状态和细胞周期，抑制细胞增殖，从而将在一定程度上逆转胃癌细胞扩散转移的恶性行为，可能对胃癌起到一定的治疗作用。3．Skp2反义寡核苷酸能显著下调胃癌细胞内Skp2蛋白水平，使得泛素—蛋白酶体系统不能有效识别和降解细胞周期负性调控因子p27蛋白，高水平的p27抑制胃癌细胞生长和增殖；同时，Skp2蛋白水平的降低使细胞DNA合成受干扰，抑癌基因p53蛋白水平升高，可能使细胞发生凋亡。